بهینهسازی آزمون کامت قلیایی برای مطالعه DNA سلول های منفرد کبدی در ماهی سفید دریای خزر (Rutilus frisii kutum)
نویسندگان
1
2
doi
چکیده
الکتروفورز سلولهای منفرد روشی است که برای سنجش آسیب DNA استفاده میشود. این روش به علت سهولت و سرعت بالا نسبت به روشهای دیگر مورد توجه قرار گرفته است. در مطالعه حاضر با اعمال برخی از تغییرات، روش مرسوم سنجش کامت قلیایی با استفاده از سلولهای منفرد کبد ماهی سفید دریای خزر(Rutilus frisii kutum) بهینهسازی شد. برای این منظور 10 عدد ماهی انگشت قد با وزن متوسط 1±7 گرم و میانگین طول کل 2±10 سانتیمتر تهیه شد و از بافت کبد آنها نمونهبرداری شد. نمونهها تا شروع آزمایشها در فریزر 80- قرار داده شدند. در بهینهسازی روش مذکور برای دستیابی به سلولهای انفرادی مراحل مختلف سانتریفیوژ حذف شد، مدت زمان انجماد ژل روی اسلایدها کاهش و مدت زمان حذف دیواره سلولی با بافر لیز کننده افزایش پیدا کرد و در نهایت روشی ساده برای آرشیو لامهای رنگآمیزی شده با اتیدیوم بروماید به مدت حداقل دو هفته ارائه شد. نتایج نشان داد علاوه بر کاهش مدت زمان و مواد و وسایل مصرفی، احتمال خطا نیز کاهش یافت. همچنین شاخصهای آزمون کامت مانند طول کامت، ارتفاع کامت، طول دنباله، درصد DNA در دنباله و Tail Moment در مقایسه با روش بهینهسازی شده اختلاف معنیداری را نشان نداد (05/0P>).