طراحی، ساخت و انتقال سازه‌های ژنی جهت خاموش‌سازی ژن‌های F3′5′H و F3′H در انگور رقم شیراز

نویسندگان

1

2 دانشگاه اصفهان

3 دانشگاه آزاد اسلامی

4 دانشگاه تهران

5 دانشگاه شهید باهنر کرمان

doi
10.22059/ijhs.2015.54120
چکیده

به‌منظور مطالعۀ عملکرد ژن‏های F3´5´H و F3´H وبرهمکنش آن‌ها در مسیر بیوسنتز فلاونوئیدها در انگور، از طریق طراحی و ساخت سازه‌های مناسب ایجاد‌کنندۀ ihpRNA، لاین‌های تراریخت حاوی سازۀ خاموش‌کنندۀ ژن F3´H وسازۀ خاموش‏کنندۀ هر دو ژن F3´5´H و F3´H ایجاد شدند. به این منظور‌ قطعاتی از دو ژن انتخاب و به‌صورت تکرارهای معکوس در ناقل pHANNIBAL درج و با بهره‌گیری از سیستم ناقل دوگانه، هر یک از سازه‌های تهیه‌شده وارد ناقل p27 mod GFP 4a و به اگروباکتری منتقل شد. کالوس‌های جنین‌زای حاصل از کشت پرچم، توسط کشت توأم با اگروباکتری تراریخت شدند. بیان ژن GFP در کالوس‌های جنین‌زا، پنج روز پس از تلقیح با میکروسکوپ مشاهده شد. در‌نهایت از کشت کالوس‌های جنین‌زای دارای سازۀ خاموشی ژن F3′H وسازۀ خاموشی هم‌زمان F3′H و F3′5′H به ‌ ترتیب 42 و 34 لاین باززایی شدند که بر‌اساس واکنش زنجیره‌ای پلیمراز، 36 لاین برای سازۀ خاموشی ژن F3′H و 27 لاین برای سازۀ خاموشی هم‌زمان F3′H و F3′5′H، مثبت ارزیابی شدند که این نتیجه نشان از کارایی بالای روش باززایی و تراریختی استفاده‌شده بود