طراحی روشی ساده با بازدهی بالا برای تخلیص پروتئین لیزوزیم سفیده تخم مرغ با استفاده از کروماتوگرافی تعویض یون

نویسندگان

1 پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

2 دانشگاه خوارزمی

3 دانشگاه خوارزمی

4 پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

doi
10.22067/ifstrj.v0i0.28652
چکیده

لیزوزیم سفیده تخم مرغ به‌دلیل ویژگیهای خاص، یکی از پروتئینهایی است که در صنایع مختلف غذایی اهمیت روزافزونی یافته است. به‌عنوان نانو فیبریل زیستی، آنتی‌بیوتیک، افزودنی غذایی طبیعی و شیرین‌کننده در نانو زیست‌فناوری، فناوری غذایی و بسته‌بندی ضدمیکروبی برای پرهیز از به‌کار بردن افزودنی‌های شیمیایی استفاده می‌شود. همچنین با توجه به اطلاعات بیوشیمیایی نسبتاً کامل، لیزوزیم سفیده تخم مرغ به‌عنوان مدل برای تحقیق در مورد ساختار و عملکرد پروتئین‌ها استفاده فراوان دارد. با توجه به کاربردهای لیزوزیم در زمینه‌های زیادی از علوم و فناوری، توسعه روشی مؤثر، ساده و ارزان برای تخلیص این پروتئین موردنیاز است. بر این اساس روش تخلیصی مبتنی‌بر رسوب‌دهی با استفاده از نمک و کروماتوگرافی تعویض یون طراحی و اجرا گردید. در این مطالعه پس از جداسازی سفیده از زرده تخم مرغ، عصاره حاصل طی دو مرحله توسط نمک آمونیوم سولفات 30 و 50 درصد تفکیک گردید. سپس لیزوزیم توسط کروماتوگرافی تعویض کاتیون در ستون SP سفارز تخلیص شد. نتایج این مطالعه نشان داد که در این روش، لیزوزیم با فعالیت ویژه (U/mg) 333 و خلوص حدود 98 تا 100 درصد تخلیص گردید. مطالعات ساختاری با استفاده از دورنگ نمایی دورانی (CD) و فلورسانس ذاتی نیز مؤید طبیعی بودن کنفورماسیون در سطح ساختار دوم و سوم پروتئین بود. در این مطالعه یک روش آزمایشگاهی ساده، سریع، کم‌هزینه و با کیفیت بالا جهت خالص‌سازی لیزوزیم بهینه گردیده است.