بیان موقت پروتئین نوترکیب Anti-VEGF مبتنی بر ناقل ویروسی (ZYMV) در گیاه سلمک (Chenopodium album)
نویسندگان
1 دانشگاه هرمزگان
2 گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
3 گروه بیوتکنولوژی و بهنژادی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد، مشهد، ایران
4 بخش بیوتکنولوژی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، انستیتوپاستور ایران، تهران، ایران
doi
10.22034/jpr.2022.2187چکیده
بیان موقت از طریق ناقلهای ویروسی بهعنوان روشی ممتاز برای تولید پروتئینهای نوترکیب گیاهی ظهور کرده است. بازده کوتاه مدت این روش نسبت به تولید زمانبر گیاهان تراریخته، تولید ارزانتر و آسانتر و غیره میتواند راه را برای تولید تجاری پروتئینهای نوترکیب هموارتر کند. در این تحقیق پروتئین Anti- Vascular endothelial growth factor (AntiVEGF) در گیاه Chenopodium album با استفاده از روش بیان موقت مبتنی بر ویروس Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) تولید شد. در ابتدا گیاهان هدف با استفاده از ناقل ویروسی حاوی ژن گزارشگر GFP (pZYMVGFP) آلوده شدند تا از توانایی آلوده کردن گیاهان با کمک این ناقل اطمینان حاصل شود. پس از ظهور علائم ویروسی روی برگ گیاهان و همچنین تائید آلودگی گیاهان با روشهای RT-PCR و Dot blot، همسانهسازی ژن هدف در ناقل ویروسی pZYMVGFP انجام شد. در مرحله بعد گیاهان هدف با استفاده از ناقل ویروسی نوترکیب (pZYMVAntiVEGF) مایهکوبی شده و بیان ژن هدف در سطح رونویسی با آزمون RT-PCR و در سطح پروتئین با آزمونهای Dot blot، Western blot و ELISA مورد بررسی قرار گرفت. آنالیزهای مولکولی انجام شده بیان موقت پروتئین نوترکیب AntiVEGF را در این گیاه نشان دادند. بنابراین سیستم بیان مبتنی بر ویروس ZYMV میتواند یک پلتفرم مناسب برای تولید پروتئینهای نوترکیب دیگر در گیاه سلمک باشد.