فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

نایسین یک آنتی‌باکتریال طبیعی است که به عنوان نگهدارنده در مواد غذایی و داروها استفاده می‌شود. تولید گیاهچه‌ی تراریخته هویج حاوی پروتئین نوترکیب نایسین به واسطه‌ی اگروباکتریوم، سویه‌ی LBA4404 و پلاسمید pBI121 بررسی شد. پلاسمید pBI121 حاوی ژن‌های گزارشگر NPTIIبه ترتیب با پیشبرهایCaMV35S می‌باشد. به منظور تهیه‌ی پلاسمید نوترکیب، ابتدا ژن نایسین از باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس شناسایی شد. پس از بهینه‌سازی کدونی، بین دوسایت برشی BamHI و SacI در وکتورpBI121 کلون سازی شد. ریزنمونه‌های ریشه، برگ، ساقه و گره-ی هویج با سوسپانسیون اگروباکتریوم حاوی پلاسمید نوترکیب با غلظت‌های مختلف مایه تلقیحآلوده شدند و در زمان‌های مختلف هم‌کشتی قرار داده شدند و بعد از سه روز در محیط کشت کالوس‌زایی حاوی کانامایسین و سفاتاکسیم کشت شدند. کالوس‌هایی که قادر به رشد روی محیط گزینش بودند، انتخاب و به محیط باززایی منتقل شدند. کالوس‌زایی در 40 درصد ریزنمونه‌ها مشاهده شد. 55 درصد کالوس‌های مقاوم، جنین‌زا شدند. جنین‌های تولید شده پس از جوانه زنی به محیط باززایی منتقل شدند. بیشترین درصد گیاهان مقاوم به کانامایسین (45 درصد) مربوط به استفاده ازریزنمونه-ی ساقه و غلظت باکتری 6/0 تا 8/0 و زمان‌های مختلف هم‌کشتی 1و 2 روز و غلظت 250 میلی‌گرم در لیتر سفاتاکسیم بود. به منظور اطمینان از عدم آلودگی گیاهان به اگروباکتریوم و تایید صحت انتقال ژن، واکنش زنجیره‌ای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای اختصاصی Vir Gene انجام و صحت انتقال ژن تایید شد. واکنش زنجیره ای پلی مراز نشان داد که 60 درصد گیاهان تراریخته فرضی، حداقل یک نسخه از ژن های nptII و نایسین را در ژنوم خود دارا هستند.