فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

 مقدمه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده ای است که و هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می کند . بنابراین استفاده از بهترین ، دقیق ترین و به صرفه ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می باشد . عامل شایع بروسلوز در ایران B. melitensis بوده و پروتئین BP26 این باکتری خاصیت آنتی ژنیسیته خوبی دارد. بنابراین هدف از این تحقیق تولید پروتئین BP26 نوترکیب از باکتریB. Melitensis توسط وکتور بیانیpET-28a می باشد .  موادوروش کار: در این مطالعه از باکتری کشت شده تخلیص DNA ژنومیک به روش پروتئیناز K و فنل/کلرفرم ، انجام شد .سپس با توجه به اطلاعات توالی ژن bp26 B. melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن ، برای ژن مذکور پرایمر طراحی شده و واکنش PCR راه اندازی، بهینه سازی و انجام شد. در ادامه محصول PCRابتدا در وکتور PTZ57R/T الحاق گردید و پس از آن در وکتور pET-28aکلون گردید . وکتور نوترکیب به میزبان E. coli BL21(DE3) منتقل گردید و پروتئین نوترکیب و با ستون کروماتوگرافی Ni-NTA علیه His tag تخلیص گردید . نتایج وبحث: اندازه ژن به دست آمده از واکنش زنجیره ای پلیمراز با اندازه بخشی از ژنbp26 B. melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن مطابقت داشت . ژن bp26 بدون القاء با IPTG به میزان کم بیان شده و با افزودن آن به غلظت mM 1 به محیط کشت در ساعت سوم ، حداکثر بیان را مشاهده نمودیم . تولید پروتئین نوترکیب BP26 از باکتری B. melitensis بومی استان مرکزی با استفاده ازناقل پلاسمیدی pET-28a امکان پذیر گردید . با توجه به اهمیت این پروتئین و به منظور بررسی های بیشتر در آینده ، امکان تولید آن در کشور فراهم شد .