تثبیت کووالانسی آنزیم پراکسیداز نوترکیب لپیدیوم درابا (LDP) بر روی ساختار آلی-فلزی روی با استفاده از گلوتارآلدئید

نویسندگان

1

2 دانشگاه علوم پزشکی اصفهان

3 دانشگاه پیام نور

4 دانشگاه شهید چمران اهواز

doi
10.22051/jab.2022.38355.1451
چکیده

مقدمه: پراکسیداز لپیدیوم درابا (LDP) آنزیمی از کلاس III پراکسیداز‌های گیاهی می‌باشد که توالی اسیدآمینه‌ای آن با پراکسیداز ترب کوهی (HRP) بیش از 90 درصد تشابه دارد.روش‌ها: در این پژوهش، به‌منظور اتصال محکم LDP به چارچوب آلی-فلزی روی (Zn-MOF)، بعد از بیان و تخلیص آنزیم، شرایط تثبیت با استفاده از لینکر گلوتارآلدئید بهینه‌سازی شد و سپس ویژگی‌های فیزیکوشیمیایی، سینتیکی و پایداری آن با آنزیم آزاد مقایسه شدند.نتایج و بحث: بهترین شرایط تثبیت با بازده‌ 67%، در غلظت‌های؛ Zn-MOF 02/0 گرم، آنزیم mg/ml 75/0 و گلوتارآلدئید 2/1 دسی‌مولار به مدت سه ساعت انکوبه‌شدن بدست آمد. نتایج نشان داد که فعالیت ویژه‌ آنزیم تثبیت شده بیش از دو برابر آنزیم آزاد افزایش یافته است و Km آن به سوبسترای TMB نسبت به آنزیم آزاد، 49 درصد کاهش یافته است. همچنین پایداری سینتیکی آنزیم تثبیت شده در برابر pH و دما نسبت به آنزیم آزاد کاهش یافت