همسانه‌سازی ژن LysA در وکتور بیانی در راستای افزایش تولید اسیدآمینه L- لیزین

نویسندگان
چراغی, سارا ID 1
حاجی حسینی, رضا ID 2
انصاری هادیپور, هادی ID 3
مهرابی, محمدرضا ID 4
فرهنگی, علی ID 5
اکبرزاده, عظیم ID 6
حمزه ای تاج, سمیه ID 7
خادمی مزده, سمانه ID 8
صفاری, زهرا ID 9
قاسمی, سهیل ID 10

1 انستیتو پاستور

2 دانشگاه پیام نور

3 دانشگاه اراک

4 انستیتوپاستور ایران

5 انستیتوپاستور ایران

6 انستیتوپاستور ایران

7 انستیتوپاستور ایران

8 انستیتوپاستور ایران

9 انستیتوپاستور ایران

10 انستیوپاستور ایران

doi
چکیده

L – لیزین یکی از اسیدهای‌آمینه ضروری است که در تغذیه انسان و دام اهمیت بسزایی دارد. این اسیدآمینه به دلیل کاربرد بسیار در صنایع دارویی و غذایی حائز اهمیت می‌باشد. تولید صنعتی لیزین از نظر اقتصادی بسیار مهم است. سالانه چندین هزار تن لیزین در جهان بوسیله Corynebacterium glutamicum تولید می‌شود. روش بررسی: پس از تهیه پرایمرهای اختصاصی با دو توالی برشی برای آنزیم‌های NheI و HindIII، ژن مورد نظر با روش PCR تکثیر یافت و جهت تعیین ترادف و هضم آنزیمی مناسب در وکتور pTZ57R/T کلون گردید. پس از تعیین ترادف و اطمینان از صحت ژن مورد نظر، قطعه ژنی با انتهای چسبنده در وکتور بیانی pET28a کلون و در سویه E.coli BL21(DE3) ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب با روش‌های هضم آنزیمی و تعیین ترادف ارزیابی شد. یافته‌ها: ژن LysA به طول kb 3/1 با توالی صحیح کلون گردید. هضم آنزیمی با موفقیت انجام شد بدین ترتیب که ژن LysA به طور کامل از پلاسمید جدا گردید. همسانه سازی با استفاده از SDS-PAGE تایید شد. بحث: در این مطالعه برای اولین بار بیان ژن آنزیم دی‌آمینوپیمیلات‌دکربوکسیلاز (4.1.1.20 EC) همسانه گردید و وکتور بیانی بررسی شد.

کلیدواژه‌ها
", دی آمینوپیمیلات دکربوکسیلاز", -", کورینه باکتریوم گلوتامیکوم", - ", pET28a", pTZ57R/T "