بررسی مولکولی برخی ژن‌ها در ایزوله‌های کلبسیلا پنومونیه از موارد بالینی مختلف

نویسندگان

1 گروه زیست‌شناسی، دانشکده آموزش، دانشگاه القادسیه، القادسیه، عراق

2 گروه زیست‌شناسی، دانشکده آموزش، دانشگاه القادسیه، القادسیه، عراق.

doi
10.22103/jab.2025.25209.1702
چکیده

هدف: این مطالعه با هدف بررسی شیوع کلبسیلا پنومونیه به‌عنوان عامل اصلی ذات‌الریه در استان المثنی، عراق، و بررسی پروفایل مولکولی ژن‌های بیماری‌زایی مرتبط با هایپرموکوویسکوزیته (مانند magA و rmpA) در سویه‌های اپیدمیک جدا شده از نمونه‌های دستگاه تنفسی تحتانی بیماران بستری مبتلا به ذات‌الریه در بیمارستان الرمیثه انجام شد. علاوه بر این، شیوع سویه‌های هایپرویرولنت کلبسیلا پنومونیه (hvKp) و سویه‌های کلاسیک کلبسیلا پنومونیه (cKp) نیز برآورد گردید.مواد و روش‌ها: در مجموع 100 ایزوله باکتریایی از نمونه‌های دستگاه تنفسی تحتانی بیماران در بیمارستان الرمیثه بین 18 آوریل 2024 و 18 سپتامبر 2024 جمع‌آوری شد. ایزوله‌ها از طریق گامه‌های زیر شناسایی شدند: مورفولوژی کلونی روی آگار مَک‌کانکی، مورفولوژی سلولی از طریق رنگ‌آمیزی گرم و کپسول و مشاهده زیر میکروسکوپ نوری، آزمایش‌های فیزیولوژیکی، آزمایش‌های بیوشیمیایی، شناسایی مولکولی با استفاده از توالی‌یابی ژن 16S rRNA، و تشخیص ژن‌های بیماری‌زایی (magA و rmpA) از طریق واکنش زنجیره‌ای پلیمراز (PCR) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن که قطعاتی به طول 1283 جفت‌باز برای magA و 409 و 340 جفت‌باز برای rmpA را تکثیر می‌کردند.نتایج: از 100 ایزوله، 20 مورد پروفایل معمولی کلبسیلا پنومونیه را نشان دادند که هویت آن‌ها با توالی‌یابی ژن 16SrRNA تأیید شد. توالی‌های 15 سویه از این ایزوله‌ها در GenBank تحت شماره‌های دسترسی PQ814166 تا PQ814180 ثبت شدند. تحلیل فیلوژنتیک این 15 سویه را به 10 کلاد تقسیم کرد: کلاد A (PQ814167, PQ814177)، کلاد B (PQ814171)، کلاد C (PQ814166, PQ814176)، کلاد D (PQ814179, PQ814180)، کلادهای E، F، و G (به ترتیب PQ814169، PQ814173، و PQ814174)، کلاد H (PQ814170, PQ814175)، کلاد I (PQ814172) و کلاد J (PQ814168, PQ814178). ژن‌های هایپرموکوویسکوزیته magA و rmpA به‌ترتیب در 55% و 50% از 20 ایزوله کلبسیلا پنومونیه شناسایی شدند. شیوع سویه‌های هایپرویرولنت کلبسیلا پنومونیه (hvKp) 50% بود.نتیجه‌گیری: این مطالعه تأیید می‌کند که کلبسیلا پنومونیه یک عامل مهم ذات‌الریه در استان المثنی، با حضور قابل‌توجه سویه‌های هایپرویرولنت (50%) که با ژن‌های magA و rmpA مشخص می‌شوند است. این یافته‌ها اهمیت بررسی مولکولی در درک بیماری‌زایی و اپیدمیولوژی کلبسیلا پنومونیه در محیط‌های بالینی را برجسته می‌کند.