فراواکاوی داده های RNA-seq گیاه دارویی پروانش (Catharanthus roseus) تحت برخی تنش های زیستی و غیر زیستی
نویسندگان
1 استاد، گروه بیوتکنولوژی و اصلاحنباتات، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد ، ایران
2 دانشجوی دکتری بیوتکنولوژی کشاورزی، گروه ا صلاح نباتات و بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
3 استادیار ، گروه اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی کشاورزی ، دانشکده کشاورزی ، دانشگاه شهرکرد ، شهرکرد ، ایران.
4 استاد، گروه بیوتکنولوژی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز، شیراز ، ایران.
5 دانشیار، آزمایشگاه تحقیقات سرطان، دانشکده پزشکی آدلاید، دانشگاه آدلاید، آدلاید، استرالیای جنوبی، استرالیا.
doi
10.22103/jab.2024.22497.1523چکیده
هدف: اهداف مهندسی ژنتیک و متابولیک را میتوان با درک فرآیندهای مولکولی پاسخ به تنش به میزان زیادی محقق کرد. پژوهشگران میتوانند از طریق مطالعات ترنسکریپتوم به دادههای فراوانی در این خصوص دسترسی پیدا کنند. استفاده از روشهای آماری پیشرفته مانند فراواکاوی برای ادغام دادههای بسیاری از منابع، روش جدیدی برای یافتن ژنهای با بیان متفاوت (DEG) ، برای غلبه بر پیچیدگی زیستی و ارائه نتایج دقیقتر ارائه میدهد. مطالعه فعلی از فراواکاوی دادههای بیانی RNA-seq گیاه پروانش برای کشف DEGهای غنیسازی شده در پاسخ به عوامل تنشزا و تولید متابولیتهای ثانویه مهم استفاده کرد.مواد و روشها: دادههای RNA-seq از پایگاه داده EMBL-EBIدریافت و پس از پیش پردازش، نقشهیابی خوانشهای با کیفیت بر روی ژنوم مرجع پروانش صورت گرفت. تغییرات بیان ژنها برای هر مجموعه داده، بررسی و سپس برای فراواکاوی استفاده شد. ژنهای با بیان متفاوت و معنیدار در پاسخ به تنشهای زیستی و غیرزیستی ، از نظر عمکرد زیستی و مسیرهای زیستی درگیر بررسی شدند و تجزیه و تحلیل همبیانی انجام شد و در نهایت ژنهای کلیدی و هاب در پاسخ به تنش و مسیر بیوسنتزی تولید متابولیتهای مهم ترپنوئید ایندول آلکالوئیدها ((TIAs)Terpenoid Indole Alkaloids ) تعیین گردید.نتایج: یافتههای فراواکاوی، 772 ژن با بیان متفاوت دارای Log2FC≥|1 (Log2 Fold Change) و FDR≤0.05 (FalseDiscovery Rate) را شناسایی کرد که 305 و 467 ژن از این ژنها به ترتیب دارای بیان بالا و پایین تحت تنش بودند. در این میان، فراواکاوی امکان شناسایی 27 ژن را فراهم نمود که در آنالیزهای انفرادی به عنوان DEG شناسایی نشده بودند. نتایج غنیسازی عملکردی DEGها اهمیت حیاتی آنها را در فرآیندهای متابولیک، پاسخ به محرکها و فرآیندهای سلولی نشان داد. آنها همچنین در مسیرهای متعددی مانند مسیر سیگنالینگ ، پروتئین کینازهای فعال شده با میتوژن ((MAPK)Mitogen activated protein kinases)، بیوسنتز متابولیتهای ثانویه، انتقال هورمونهای گیاهی و مسیرهای متابولیک تحت تنش اهمیت معنیداری داشتند. از طریق تجزیه و تحلیل شبکه همبیانی، ژنهای هاب پاسخدهنده به تنش و مرتبط با مسیرهای بیوسنتز ترپنوئید ایندول آلکالوئیدها (TIA) یافت شدند که میتوانند ژنهای بالقوهای در سنتز ترکیبات دارویی منحصر به فرد گیاه باشند.نتیجهگیری: در این تحقیق، با بررسی پاسخهای مولکولی گیاه پروانش تحت تنشهای مختلف با استفاده از رویکردهای فراواکاوی و زیستشناسی سامانهای ، ژنهای کلیدی و جدید شناسایی شدند. این ژنها دارای توانایی بالقوه جهت استفاده به عنوان ژنهای کاندید در پروژههای مهندسی ژنتیک و متابولیک بوده که به منظور افزایش توانایی گیاه در تولید متابولیتهای درمانی در آینده به کار گرفته شوند.