بیان فاکتور رشد استخوانی نوترکیب انسانی2 (rhBMP2) در ریشههای موئین تراریخت توتون
نویسندگان
1 دانشیار، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران.
2 استاد، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران.
3 مربی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران.
4 کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران، ایران.
5 دانشیار، دانشکده علوم زیستی ، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران.
6 استادیار، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی زنجان، ایران.
doi
10.22103/jab.2018.2065چکیده
با توجه به افزایش جمعیت جهان، امروزه تقاضا برای تولید پروتئینهای نوترکیب در بافتهای گیاهی در حال افزایش است. ریشههای موئین بخاطر زیست توده و ثبات ژنتیکی بالا به عنوان بافت هدفی مناسب مدنظر می باشند. گلیکوپروتئین تنظیمی BMP2، به عنوان یکی از مهمترین فاکتورهای رشد با کاربرد درمانی و تحقیقاتی در مهندسی بافت مطرح میباشد. انتخاب میزبان گیاهی مناسب، بافت مطلوب و سازه ژنی مناسب، از عوامل مهم در بالا بردن میزان تولید پروتئین نوترکیب است. در راستای حصول این هدف، در مطالعه حاضر تولید پروتئین نوترکیبBMP2 در ریشههای مویینه تراریخت گیاهان توتون و کلزا مورد بررسی قرار گرفت. برای تهیه سازه ژنی، در بالادست ژن BMP2، توالیهایUTR) TMV (5′و KOZAK جهت افزایش بیان و در پایین دست ژن، توالی شش تایی هیستیدینی جهت تخلیص پروتئین و توالیKDEL بعنوان سیگنال نگهدارنده پروتئین درشبکه اندوپلاسمی تعبیه شدند. این توالی ژنی تحت کنترل پیشبرنده CaMV 35Sبیان شد. برای انتقال سازه ژنی مذکور به ریز نمونههای برگی توتون یک ماهه به عنوان گیاه مدل و انتهای کوتیلدونی کلزا شش روزه به عنوان یک گیاه زراعی از باکتری Agrobactrium rhizogenes استفاده گردید. پس از رشد ریشه های موئین و غربالگری آن ها به روش PCR ، تایید درسطح رونویسی با روش RT-PCR انجام گرفت. در عین حال، تایید بیان پروتئین نوترکیب در میزبان با روش های آزمون الایزا و لکه گذاری وسترن صورت پذیرفت. نتایج این تحقیق بیان گر کارایی بالای سیستم ریشه های مویینه برای تولید فاکتورهای نوترکیب درمانی میباشد، که استفاده از آنها را در رآکتورهای زیستی مطرح می سازد.