همسانه‌سازی ژن شبه انسولین انسانی در ناقل‌های بیانی گیاهی

نویسندگان

1 دانشجوی کارشناسی ارشد، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان

2 دانشجوی کارشناسی ارشد، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان

3 استادیار، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید مدنی آذربایجان

doi
10.22103/jab.2017.1666
چکیده

گیاهان تراریخت، بیورآکتورهای مناسبی برای تولید پروتئین­های نوترکیب در سطوح بالا و با کیفیت بهتر می­باشند. همسانه­سازی ژن کدکننده پروتئین هدف در ناقل بیانی مناسب یکی از مراحل مهم در انتقال و بیان موفق پروتئین در گیاه مورد نظر می­باشد. هدف از این تحقیق، همسانه­سازی cDNAی فاکتور رشد شبه انسولین-1 (IGF1) در ناقلهای بیانی مناسب گیاهی بود. برای این منظور، ابتدا با استفاده از یک جفت آغازگر اختصاصی، cDNAی ژن IGF1 تکثیر و با استفاده از سایت­های برشی تعبیه شده در ساختار آغازگر در ناقل پایه pMCS5 وارد گردید. با توجه به مزایای غلات بدلیل کشت وسیع، بیوماس بالا، قابلیت ذخیره دانه و قابلیت استفاده خوراکی برای تولید پروتئین­های دارویی، پس از توالی­یابی، cDNA در یک ناقل مناسب برای انتقال و بیان پروتئین در غلات همسانه­سازی گردید. همچنین با توجه به اینکه کلروپلاست­های تراریخت پتانسیل بیشتری برای تولید پروتئین نوترکیب عملکردی در سطوح بالا دارند، cDNAی توالی­یابی شده در دو ناقل اختصاصی برای انتقال و بیان IGF1 در کلروپلاست توتون نیز همسانه­سازی گردید. در یکی از این ناقلها، ژن گزینشگر بوسیله دو توالی مستقیم LoxP احاطه شده تا امکان حذف ژن انتخابگر از طریق سیستم Cre/Lox پس از گزینش گیاهان تراریخت فراهم گردد.