فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

از مهم­ترین عوامل موثر بر افزایش تولید پروتئین نوترکیب در گیاه، بیان آن در بافت مناسب و نیز افزایش پایداری و تجمع پروتئین با استفاده از عوامل هدف­گیری کننده به جایگاه­های مناسب سلول است. در این تحقیق برای بیان اینترفرون گامای انسانی در بذر توتون و هدایت آن به شبکه آندوپلاسمی از پیشبرنده اختصاصی بذر (Napin)، توالی کوزاک در انتهای '5 و توالی KDEL در انتهای '3 ژن IFNγ استفاده شد. ژن IFNγ ابتدا در ناقل pGEM®-T Easy همسانه­سازی و پس از تایید صحت آن با استفاده از روش PCR، هضم آنزیمی و توالی­یابی، در ناقل بیانی گیاهی pBI121 زیر­همسانه­سازی گردید. ناقل نوترکیب pBI IFNγ  به سویه LBA4404 اگرباکتریوم معرفی و این باکتری برای تراریختی ریزنمونه­های برگی توتون استفاده شد. نوساقه­های باززائی شده در محیط انتخابی حاوی کانامایسین گزینش شدند. آنالیز گیاهان تراریخت در سطح DNA و مشاهده قطعه 432 جفت بازی IFNγ)) و قطعه 795 جفت بازی (NPTII) در واکنش PCR و هضم آنزیمی بیانگر انتقال سازه مدنظر به ژنوم گیاه بود. همچنین رونویسی از ژن IFNγ با RT-PCR تائید شد.  بررسی­ها در سطح پروتئین با استفاده از SDS-PAGE بیان موفقیت آمیز ژن IFNγ را نشان داد. نتایج حاصل نشان می­دهد که بذور گیاهی پتانسیل بالایی برای تولید پروتئین­های نوترکیب دارند