جداسازی، همسانهسازی و توصیف ملکولی ژنهای رمزکننده آنزیمهای اندونوکلئاز اختصاصی تکرشته از گیاه جعفری (Petroselinum crispum L.)
نویسندگان
1
2
3
doi
10.22103/jab.2015.1359چکیده
نوکلئازهای اختصاصی تکرشته (خانواده S1/P1)، بطور گسترده در تحقیقات ژنتیک مولکولی مورد استفاده قرار می گیرند. پرکاربردترین آنزیم های این خانواده، اندونوکلئازهای گیاهی هستند که از قابلیت برش اختصاصی نواحی جفت شدگی ناجور در مولکول های DNA هترودوپلکس برخوردارند. تکنیک هضم آنزیمی DNA هترودوپلکس مبتنی بر فعالیت این اندونوکلئازها، یکی از متداولترین تکنیکهای مورد استفاده برای شناسایی جهشهای نقطهای در ژنوم است. در این تحقیق، توالیهای ژنی رمزکننده آنزیمهای اندونوکلئاز اختصاصی تکرشته از گیاه جعفری (Petroselinum crispum) با استفاده از آغازگرهای هترولوگ در واکنش PCR جداسازی گردیدند. توالی های ژنی جداسازی شده، پس از همسانه سازی و تعیین ماهیت، به نامهای PARS I و PARS II نامگذاری شدند. مطالعه نرمافزاری خصوصیات فیزیکوشیمیایی، ساختار مولکولی و قرابت ژنتیکی نشان داد که دو آنزیم PARS I و PARS II به خانواده نوکلئازهای S1/P1 تعلق داشته و شباهت زیادی به نوکلئازهای اختصاصی DNA هترودوپلکس نشان میدهند. با این حال، تعیین مکانیزم فعالیت و ترجیح سوبسترایی این نوکلئازها، مستلزم بررسی فعالیت نمونه خالص طبیعی یا نوترکیب آنها بر روی سوبسترای DNA هترودوپلکس می باشد.