کلونینگ، بررسی خصوصیات ملکولی و پیشبینی بیان مجازی ژن فیتاز phyC از باسیلوس سابتیلیس
نویسندگان
1 1 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه علوم دامی، دانشگاه فردوسی مشهد
2 2دانشیار، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد 3دانشیار، گروه پژوهشی بیوتکنولوژی کشاورزی و دامی، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه فردوسی مشه
3 استادیار، گروه بیوشیمی، دانشکده علوم، دانشگاه فردوسی مشهد
4 استادیار، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد
5 دانشیار گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد
6 استاد گروه علوم دامی دانشکده کشاورزی دانشگاه فردوسی مشهد
7 دانشجوی دکتری، گروه علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه فردوسی مشهد
doi
10.22103/jab.2012.465چکیده
فیتاز آنزیمی است که اسید فایتیک را هیدرولیز و فسفر معدنی تولید میکند. یکی از منابع بیانکننده آنزیم فیتاز، باکتریها هستند که در این میان جنس باسیلوس مهمترین باکتری تولیدکننده فیتاز قلیایی مقاوم به حرارت می باشد. ژن فیتاز خارج سلولی باکتری باسیلوس سابتیلیس phyC با استفاده از آغازگرهای اختصاصی و لینکردار حاوی سایتهای برشی BamHI و HindIII جداسازی شد. به منظور انجام توالییابی و بررسی خصوصیات، ژن تکثیر شده phyC به ناقل pTZ57R/T انتقال داده شد. حضور ژن هدف در ناقل کلونینگ pTZ57R/T با استفاده از روش کلونی PCR و هضم آنزیمی تایید شد. ساختارهای نوکلئوتیدی و پیش بینی ساختار پروتئینی آنزیم فیتاز با استفاده از آنالیز توالی یابی مشخص گردید. وزن مولکولی آنزیم فیتاز 42 کیلو دالتون تخمین زده شد. نتایج این مطالعه نشان داد که به خوبی می توان نسبت به کلونینگ ژن فیتاز در وکتور کلونینگ اقدام کرد. از طرف دیگر پیش بینی مجازی آنزیم فیتاز با استفاده توالی نوکلئوتیدی و اسید آمینه، پتانسیل تولید آنزیم مقاوم به حرارت را نشان داد.
