شناسایی و کلونسازی خانواده ژنی چالکون سنتاز گیاه خار مریم (Silybum marianum L.)
نویسندگان
1 استادیار بخش فیزیولوژی مولکولی پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، استان البرز، کرج
2 فارغ التحصیل کارشناسی ارشد اصلاح نباتات پردیس ابوریحان دانشگاه تهران، استان تهران، شهرستان پاکدشت.
3 استادیار گروه زراعت و اصلاح نباتات پردیس ابوریحان دانشگاه تهران، استان تهران، شهرستان پاکدشت
4 دانشیار گروه زراعت و اصلاح نباتات پردیس ابوریحان دانشگاه تهران، استان تهران، شهرستان پاکدشت
5 استادیار بخش فیزیولوژی مولکولی پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی ایران، استان البرز، کرج.
doi
10.22103/jab.2012.467چکیده
سیلیمارین یک ترکیب فلاونوئیدی است که از دانههای گیاه خارمریم بهدست میآید و دارای خواص دارویی متعددی میباشد. چالکونسنتاز نقش کلیدی در مسیر بیوسنتزی فلاونوئیدها دارد بنابراین شناسایی ژن رمزده آن گامی مهم در مهندسی متابولوم گیاه خارمریم میباشد. بدینمنظور پس از جمعآوری دادههای توالی موجود در مورد خانواده ژنی چالکونسنتاز در سایر گیاهان، همردیفی آنها و تعیین نواحی حفظ شده، چهار آغازگر دژنره بر اساس این نواحی طراحی شد. قطعات ژنی تکثیر شده در PCR با استفاده از این جفت آغازگر از ژنوتیپ بومی منطقه برازجان و رقم اصلاح شده مجار در ناقل مناسب همسانهسازی و سپس تعیین توالی شدند. مطالعه توالی نوکلئوتیدی حاصل و توالی اسیدآمینهای آنها، منجر به شناسایی دو عضو از خانواده ژنی چالکونسنتاز در این گیاه گردید. بر اساس نقاط متنوع، شش آغازگر اختصاصی برای هریک از اعضا جهت تکثیر cDNA از روی RNAی کل رقم مجار درسیستمRACE طراحی شد. قطعات cDNAی تکثیر شده در3'RACE و5'RACE در ناقل مناسب همسانه سازی و سپس تعیین توالی شدند. توالی کامل cDNAی ژن چالکون سنتاز از همپوشانی توالیهای5'RACE و 3'RACE عضو یک شناسایی گردید که قالب باز خواندنی آن دارای 1239 باز بوده و شامل اگزون یک (190 باز) و اگزون دو (1049 باز) میباشد که به ترتیب 63 و 349 اسیدآمینه را رمز میکنند. مطالعه کل توالیهای نوکلئوتیدی و اسیدآمینهای بهدست آمده، منجربه شناسایی سه عضو از خانواده ژنی چالکونسنتاز در این گیاه برای اولین بار شد که دارای دومینهای حفظ شده انتهای آمین و کربوکسیل چالکون سنتاز میباشند