بررسی و مقایسه خصوصیات بیوشیمیایی، ساختار مولکولی و روند تکامل ژنتیکی دو آیزوفرم تیوردوکسین نوع h از گیاه انگور عسکری (Vitis vinifera L. cv. Askari)
نویسندگان
1 عضوهیات علمی گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشکده فنی و مهندسی دانشگاه بین المللی امام خمینی قزوین
2 کارشناس ارشد گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشکده فنی ومهندسی دانشگاه بین المللی امام خمینی قزوین
3 عضوهیات علمی گروه بیوتکنولوژی کشاورزی دانشکده فنی ومهندسی دانشگاه بین المللی امام خمینی قزوین
doi
10.22103/jab.2011.359چکیده
تیوردوکسینها (Trxs) پروتئینهایی کوچک و مقاوم در برابر حرارت هستند که در واکنشهای تبادلی دیتیول/دیسولفید شرکت میکنند. در مقایسه با سایر موجودات زنده، گیاهان حاوی شش نوع تیوردوکسین مختلف شامل f، h، m، o، x و y میباشند که تیوردوکسین نوع h با داشتن اشکال چندگانه، در فرآیندهای مختلفی همچون محافظت سلول در برابر تنش اکسیداتیو و تنشهای زنده و غیرزنده دخالت دارد. دو ژن تیوردوکسین نوع h، تحت عناوین VvTrxh4 و VvCxxS2، از بافت حبه گیاه انگور عسکری (Vitis vinifera L. cv. Askari) با استفاده از روش واکنش زنجیرهای پلیمراز با نسخهبرداری معکوس (RT-PCR) جداسازی و در ناقل پلاسمیدی pUC19 همسانهسازی شده و خصوصیات بیوشیمیایی، ساختار مولکولی و روند تکامل ژنتیکی آنها مورد بررسی و مقایسه قرار گرفت. بررسی توالی نوکلئوتیدی نشان داد که چارچوب خواندنی ژنهای همسانهسازی شده VvTrxh4 و VvCxxS2 به ترتیب bp345 و bp 381 طول داشته و پروتئینهایی با 114 و 126 اسیدآمینه را کد میکنند. بررسی توالی پروتئینی نشان داد که ژن VvTrxh4 دارای جایگاه فعال معمول WCGPC بوده، در حالی که جایگاه فعال ژن VvCxxS2 به صورت غیرمعمول و به شکل WCIPS میباشد. وزن مولکولی محاسبه شده و نقطه آیزوالکتریک پیشبینی شده پروتئین VvTrxh4 به ترتیب برابر 76/12 کیلودالتون و 22/5 و پروتئین VvCxxS2 به ترتیب برابر 25/14 کیلودالتون و 68/4 میباشد. بررسیهای ساختاری نشان داد که پروتئینهای بدست آمده از نظر ساختار سهبعدی مشابه میباشند. در حالی که بررسیهای فیلوژنتیکی ژنهای همسانهسازی شده با تیوردوکسینهای سایر گیاهان نشان داد که این ژنها متعلق به زیرگروههای متفاوت میباشند. در این تحقیق ژن VvTrxh4 متعلق به کلاس A از زیرگروه I بوده، اما ژن VvCxxS2 به کلاس B از زیرگروه III تیوردوکسینهای نوع h تعلق دارد