ایمنی‌زایی پروتئین کایمر نوترکیب STXB-Intimin- EscC علیه بیماری‌زایی باکتری Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7

نویسندگان

1 دانشیار، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین، تهران، ایران،

2 استاد، گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران،

3 دانشجوی دکترای، گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران،

4 استاد، گروه زیست‌شناسی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران

doi
چکیده

انتروهموراژیک اشریشیا کلی سروتیپ O157:H7 یک‌ عامل بیماری‌زای مهم در بین انسان و حیوانات است که باعث عارضه‌های گوارشی متعددی از جمله کولیت هموراژیک و در موارد حاد سندرم اورمی همولیتیک (HUS) می‌شود. با توجه به خطرات ناشی از درمان آنتی‌بیوتیک‌ها در عفونت E.coli O157:H7، واکسن‌ها روشی امیدبخش برای پیشگیر‌‌ی از این عفونت را ارائه می‌کنند. هدف از این تحقیق بررسی ایمنی‌زایی آنتی‌ژن کایمر (SEI) StxB-EscC-Intimin علیه باکتری E.coli O157:H7 بود. بیان پروتئین نوترکیب تحت تأثیر IPTG در E.coli BL21 DE3 القاء و توسط SDS-PAGE ارزیابی شد. پروتئین نوترکیب با ستون کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA خالص و به روش الایزا با استفاده از آنتی‌بادی اختصاصی ضد توکسین شیگا تأیید گردید. ایمنی‌زایی در موش با پروتئین خالص انجام و تیتر آنتی‌بادی به روش ELISA تعیین شد. ریزش باکتری و مرگ و میر در موش‌ها مورد بررسی قرار گرفت. بررسی آماری با آزمون‌‌های دانکن و T-test با نرم‌افزار SPSS انجام شد. بیان پروتئین با وزن مولکولی 5/74 کیلو دالتون در SDS-PAGE مشاهده شد. حداقل مقدار آنتی‌ژن شناسایی شده با آنتی‌بادی مرغی ضد شبه شیگا با استفاده از روش ELISA 156نانوگرم بود. ریزش باکتری در موش ایمن تا cfu/ml 102 کاهش یافت و 80 درصد از موش‌های ایمن پس از تزریق LD5010 از باکتری زنده ماندند. نتایج نشان داد که پروتئین نوترکیب کایمر می‌‌تواند کاندید واکسن مناسبی علیه E.coli O157:H7 باشد.