فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

زمینه مطالعه: لکتین نوع سی توکسوکارا کنیس عامل اصلی تعدیل سیستم ایمنی و تحریک لنفوسیت‌‌های T تنظیمی در میزبان می‌باشد و باعث افزایش جمعیت سلول‌های(Forkhead box P3) Foxp3+ و کاهش التهاب می‌شود و می‌تواند به عنوان کاندیدای دارویی در درمان بیماری‌‌های خودایمن معرفی شود.هدف: مقایسه تخلیص پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی توکسوکارا کنیس در دو شرایط واسرشته و طبیعی به منظور افزایش بازیابی و حفظ فعالیت زیستی آن می‌باشد. روش‎کار: یک توالی به طول 660 جفت‌باز از لکتین نوع سی توکسوکارا کنیس در پلاسمید pET32-a سنتز و در باکتری اشریشیا کلی BL21(DE3) در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 6 ساعت با ایزوپروپیل بتا-دی-۱-تیوگالاکتوپیرانوزید (IPTG) 1 میلی‌مولار القا و بیان شد. در مطالعه حاضر بافر لیز‌کننده اوره 8 مولار (pH=8) و بافر حاوی ایمیدازول 01/0 مولار همراه با لیزوزیم 1 میلی‌گرم/میلی‌لیتر برای شکستن سلول‌های باکتریایی و محلول‌سازی پروتئین مورد استفاده قرار گرفت. بافرهای فوق همراه با سونیکه کردن، به منظور شکستن سلول‌های باکتری استفاده شد و لام‌های میکروسکوپی تهیه و با رنگ‌آمیزی گرم بررسی شدند. پروتئین نوترکیب استخراج شده تحت شرایط واسرشته و طبیعی با استفاده از رزین نیکل-نیتریلوتری‌استیک‌اسید آگاروز و رزین نیکل-نیتریلوتری‌استیک‌اسید سفاروز تخلیص شد. ارزیابی ایمونوژنیسیته پروتئین نوترکیب با روش دات‌بلات با سرم خرگوش چالش شده با پروتئین نوترکیب انجام شد.نتایج: بیشترین مقدار بیان پروتئین با وزن مولکولی 41 کیلودالتون در ساعت ششم پس از القا در دمای 37 درجه سانتی‌گراد با IPTG 1 میلی‌مولار حاصل شد. بافر اوره 8 مولار (pH=8) حاوی لیزوزیم 1 میلی‌گرم/میلی‌لیتر همراه با سونیکه کردن، مقدار زیادی از پروتئین نوترکیب استخراج شد. تخلیص پروتئین تحت شرایط واسرشته با استفاده از رزین نیکل- آگاروز مقدار پروتئین بیشتری نسبت به رزین نیکل سفاروز بازیابی شد. نتایج آزمایش دات‌بلات نیز حضور آنتی‌بادی IgG (Immunoglobulin G) اختصاصی علیه پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی توکسوکارا کنیس در سرم خرگوش ایمن شده تا رقت 1:500 را مورد تأیید قرار داد.نتیجه­گیری نهایی: استفاده از روش واسرشته بر فعالیت زیستی پروتئین تأثیر منفی نداشت و با این روش مقدار بیشتری پروتئین در سیستم باکتریایی بازیابی گردید. پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی توکسوکارا کنیس تخلیص شده با این روش می‌تواند با اهداف مختلف مورد استفاده قرار گیرد.