فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

زمینۀ مطالعه: هپارین یک گلیکوزآمینوگلیکان سولفاته است. خون یک منبع متداول برای ردیابی DNA موجود در انواع نمونه‌ها می‌باشد که برای جلوگیری از انعقاد آن از ضد انعقادهایی چون هپارین و  EDTAاستفاده می‌شود. هپارین به علت داشتن اثر مهارکنندگی شدید برروی PCR در نمونه‌هایی که قرار است مورد ردیابی DNA قرار بگیرند، بکار نمی‌رود. جهت حذف اثر مهاری هپارین بر آزمون PCR، روش‌های فیزیکی، شیمیایی و آنزیمی وجود دارد. هدف: مطالعه حاضر ابتدا با هدف مقایسه شدت اثر مهارکنندگی دو ضد انعقاد هپارین وEDTA  بر Real-TimePCR(qPCR)، سپس بررسی اثر آنزیم هپاریناز موجود در عصاره محیط‌کشت باکتری سودوموناس‌ آئروژینوزا بر رفع اثر مهار‌کنندگی هپارین طی‌ Real-TimePCR صورت گرفت.روش‎کار: در مطالعه حاضر ابتدا دو نمونه خون هپارینه و EDTAدار جهت بررسی شدت اثر مهارکنندگی مورد آزمون Real-TimePCR قرار گرفتند. سپس در ادامه به نمونه خون هپارینه آلوده به باکتری اشیرشیاکلی در‌ دو گروه با شرایط مختلف، عصاره محیط کشت باکتری سودوموناس آئروژینوزا اضافه شد. در گروه اول ابتدا DNA موجود در نمونه خون هپارینه، توسط روش فنول-کلروفرم ایزوآمیل ‌الکل استخراج شد. سپس‎ گرمخانه‌گذاری این نمونه‌ها با عصاره محیط‌کشت باکتری سودوموناس ‌آئروژینوزا در ساعات مختلف صورت گرفت، اما درگروه دوم، نمونه‌ها قبل‌ از استخراج DNA، در ساعات مختلف گرمخانه‌گذاری شدند. همچنین غلظت DNA موجود در هر دو گروه توسط دستگاه نانودرآپ انداز‌ه‌گیری شد و در نهایت تمام نمونه‌ها مورد آزمون Real-TimePCR قرارگرفتند.نتایج: تجزیه ‌و تحلیل نتایج حاصل از نمونه‌های مورد پژوهش نشان داد که نمونه خون هپارینه با وجود این‌که غلظت DNA بیشتری را نسبت به نمونه خون EDTAدار شامل می‌شود، اما به‌طور کامل مانع تکثیر ژنوم ‌می‌شود. همچنین تیمار خون هپارینه به همراه عصاره محیط‌کشت باکتری سودوموناس ‌آئروژینوزا قبل از استخراج DNA به مدت زمان بیشتر از 24 ساعت، موجب رفع اثر مهاری هپارین طی‌ آزمون Real-TimePCR، حتی در چرخه آستانه (CT:Cycle thershold) پایین‌تر از نمونه EDTAدار می‌شود.نتیجه­گیری نهایی: استفاده از عصاره محیط‌کشت باکتری سودوموناس آئروژینوزا ممکن است محققین را قادر سازد، بتوانند بدون نیاز به استفاده از آنزیم هپاریناز تجاری گران‌بها و محدود، از نمونه خون هپارینه در راستای تقویت و تشخیص ژنوم استفاده کنند.