فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

زمینۀ مطالعه: توکسوکاریازیس یک بیماری مهم زئونوز است که توسط نوزاد مرحله دوم توکسوکارا کنیس و توکسوکارا کتی ایجاد می‌شود. در خیلی از کشورهای معتدل توکسوکاریازیس رایج‌ترین عفونت کرمی است و سبب بروز عوارض شدید می‌شود. لکتین نوع سی از محصولات تولیدی در مرحله نوزادی این انگل است. این پروتئین در واکنش‌های ایمنی ازجمله ارسال سیگنال سلول‌های ایمنی در مهره‌داران، فعال کردن ایمنی ذاتی در مهره‌داران و بی‌مهرگان و القا هموستاز دخالت دارد.هدف: مطالعه حاضر با هدف بهینه‌سازی تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس و بررسی خواص آنتی‌ژنی (پادگنی) آن صورت گرفته است.روش‎کار: توالی نوکلئوتیدی مرجع مربوط به لکتین نوع سی(CTL) انگل توکسوکارا کنیس از بانک ژن استخراج شد. سپس پلاسمید pET32a حاوی توالی مورد نظر توسط شرکت GENERAY سنتز گردید. پلاسمید نوترکیب به باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3) منتقل شد. بیان این پروتئین با استفاده از روش‌های SDS-PAGE و دات­بلات بررسی و با سرم انسانی مثبت، مورد تأیید قرار گرفت.نتایج: مطالعه حاضر نشان داد که بهینه‌سازی شرایط برای دستیابی به بیشترین میزان تولید پروتئین با انتخاب باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3)، دمای 37 درجه سانتی‌گراد پس از القا و غلظت 1 میلی‌مولارIPTG  حاصل گردید. پس از بهینه‌سازی پروتئین نوترکیب با غلظت 6/0±1160میکروگرم بر میلی‌لیتر استخراج شد. وزن مولکولی پروتئین حاصل 42 کیلودالتون بود. پاساژ پلاسمید نوترکیب قبل از القا، در باکتری اشریشیا کلای سویه DH5α باعث افزایش معنی‌دار بیان پروتئین گردید. نتایج ارزیابی بهینه‌سازی شرایط، با روش‌های SDS-PAGE و دات‌بلات نشان داد که بیشترین میزان تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس در شرایط بهینه‌سازی حاصل شده است.نتیجه­گیری نهایی: جهت تولید هر پروتئین نوترکیب به‌ویژه در مقادیر زیاد و به‌منظور مصارف تجاری لازم است که بهینه‌سازی مخصوص آن پروتئین، انجام شود و دقیقاً براساس شرایط بهینه‌سازی تعیین‌شده، تولید پروتئین نوترکیب قابل انجام است. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که شرایط بهینه جهت تولید پروتئین نوترکیب لکتین نوع سی، انتخاب باکتری اشریشیا کلای سویه BL21(DE3)، دمای 37 درجه سانتی‌گراد و مدت زمان 4 ساعت پس از القا است که با حفظ ویژگی‌های ایمنی‌زایی نیز همراه است. به‌طورکلی می‌توان چنین نتیجه‌گیری کرد که سویه باکتری انتخاب شده و همچنین دما و زمان القا بر میزان بیان و تولید پروتئین‌های نوترکیب مانند لکتین نوع سی انگل توکسوکارا کنیس تأثیر مستقیم دارد.