جداسازی، شناسایی و تعیین هویت مولکولی گونههای کریپتوسپوریدیوم در اسهال گوسالهها به روش multiplex nested-PCR
نویسندگان
1 آزمایشگاه تک یاختهشناسی، بخش تحقیق و تشخیص بیماریهای انگلی، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی کرج، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
2 آزمایشگاه تک یاختهشناسی، بخش تحقیق و تشخیص بیماریهای انگلی، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی کرج، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
3 آزمایشگاه تک یاختهشناسی، بخش تحقیق و تشخیص بیماریهای انگلی، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی کرج، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
doi
10.22059/jvr.2019.273077.2886چکیده
زمینه مطالعه: تشخیص گونههای کریپتوسپوریدیوم براساس خصوصیات مورفولوژی بسیار محدود بوده و به تنهایی فاقد ارزش تاکسونومیک است، و لذا استفاده از روشهای مولکولی این محدودیتها را تا حدودی برطرف میسازد. هدف: هدف از این مطالعه تعیین ژنوتیپهای غالب کریپتوسپوریدیوم در گوسالههای مبتلا به اسهال بود. روش کار: مطالعه در گوسالههای کمتر از 3 ماه و برای مدت 2 سال انجام شد. در طول دوره مطالعه، 160 نمونه مدفوع از گوسالههای جوان جمعآوری شده و ابتدا از طریق میکروسکوپی و سپس با استفاده از تکنیکهای مولکولی مورد بررسی قرار گرفت. مدفوع از جهت حضور اواوسیستهای کریپتوسپوریدیوم توسط روش شناورسازی با آب شکر شیتر و به دنبال آن روش رنگآمیزی ذیل نلسون مورد بررسی قرار گرفت. دی ان آ انگل استخراج و پروتکل multiplex nested-PCR براساس ژن 18srRNA جهت شناسایی سه گونه سازگار در گاو (یعنی کریپتوسپوریدیوم اندرسونی، کریپتوسپوریدیوم بوویس و کریپتوسپوریدیوم رایانه) به علاوه گونه مشترک بین انسان و دام یعنی کریپتوسپوریدیوم پارووم انجام شد. نتایج: 110 نمونه مدفوع از دامداریهای موجود در استان البرز و 50 نمونه مدفوع نیز از دامداریهای شهر شاهرود جمعآوری گردید. از 160راس حیوان مورد آزمایش 90 راس ماده و 70 راس نر بودند. در مجموع در میان 160 راس دام مورد آزمایش 85 مورد (12/53 درصد) مبتلا به اسهال بودند که 55 مورد (37/34درصد) از این تعداد حیوان تحت آزمایش با استفاده از رنگآمیزی ذیل نلسون مثبت تشخیص داده شدند. از آنجاییکه تمام موارد مثبت مربوط به نمونههای اسهالی و مرتبط با گوسالههای زیر یک ماه بود، ارتباط معنیداری مابین وضعیت اسهال و حضور این انگل مشاهده گردید (05/0p <). از نظر توزیع فصلی تفاوتی در میزان موارد اسهالی و موارد مثبت انگلی مشاهده نشد. حضور باند 305 جفت بازی در کلیه نمونههای مثبت ذیل نلسون موید حضور گونه کریپتوسپوریدیوم پارووم در تمامی نمونهها بود. نتیجهگیری نهایی: گوسالههای شیرخوار بیشتر با کریپتوسپوریدیومپارووم آلوده میشوند که تحقیق حاضر نیز موید این مطلب بود.