جداسازی، کشت و تعیین هویت سلولهای بنیادی مشتق از بافت چربی با استفاده از روش اکسپلنت_آنزیمی
نویسندگان
1 دانشگاه خوارزمی، دانشکده علوم زیستی، گروه علوم جانوری، تهران، ایران
2 دانشگاه خوارزمی، دانشکده علوم زیستی، گروه سلولی و مولکولی، تهران، ایران
3 گروه علوم جانوری، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران
4 گروه زیستشناسی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه بوعلی سینا، همدان
5 گروه علوم جانوری، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران
doi
10.52547/JCT.8.4.303چکیده
هدف: در این مطالعه، ترکیبی از روش آنزیمی و اکسپلنت را برای جداسازی و کشت سلولهای بنیادی چربی مورد استفاده قرار گرفت.مواد و روشها: بافت چربی ناحیهی شکم از رَتهای نر نژاد ویستار جدا شد. بافتها به قطعات کوچک (mm2≈( تقسیم شدند، سپس آنزیم Trypsin –EDTA با غلظت 25/0 درصد به بافتها افزوده شد و بهدنبال آن بهمدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد در انکوباتور شیکردار قرار داده شدند. سپس بافت تیمار شده با آنزیم سانتریفیوژ شده و قطعات شناور کشت داده شدند. آنالیزهای آماری مربوط به تعداد سلولها با استفاده از نرم افزار GraphPad Prismv6 مـورد بررسـی قرار گرفت.نتایج: نتایج نشان داد که جمعیت سلولهای بنیادی چربی جداسازی شده توسط این روش ترکیبی، تحت تاثیر تنش کمتری قرار خواهند گرفت و جمعیت سلولی همگن و مشابهی را از لحاظ ظاهری و ریختشناسی نشان خواهند داد و نیز آنالیز فلوسایتومتری مارکرهای سطحی نشان داد که این سلولها برای CD73، CD105، CD44 و CD90 مثبت و برای CD34، CD45 و CD11b منفی بودندنتیجهگیری: در این مطالعه نشان داده شد که سلولهای بنیادی مشتق از بافت چربی رت میتواند با روش جدید اکسپلنت_آنزیمی جداسازی شوند که این روش، یک روش کشت سلولی با قابلیت تکرارپذیری بالا و بسیار به صرفه از لحاظ اقتصادی برای کاربردهای کلینیکی میباشد.