افزوده سازی و شناسایی مولکولی توالی cDNA کد کننده یک پپتید توکسین از غده زهر عقرب Mesobuthus eupeus در استان خوزستان

نویسندگان

1 گروه علوم دامی، دانشکده علوم دامی و صنایع غذایی دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان، خوزستان- ایران

2 گروه علوم پایه، بخش بیوشیمی و مولکولی دانشکده دامپزشکی دانشگاه شهید چمران اهواز، خوزستان- ایران

3 گروه علوم دامی، دانشکده علوم دامی و صنایع غذایی دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان، خوزستان- ایران

4 گروه علوم دامی، دانشکده علوم دامی و صنایع غذایی دانشگاه کشاورزی و منابع طبیعی رامین خوزستان، خوزستان- ایران

doi
10.22059/jvr.2016.58725
چکیده

زمینه مطالعه: زهر عقرب Mesobuthus eupeus شامل پپتید توکسین‌هایی است که برخی از آن‌ها در عملکرد کانال‌های پتاسیمی دخالت دارند. این نقش می‌تواند تأثیر مهمی در مطالعات فارماکولوژی و فیزیولوژی این کانال‌ها ایفا کند. هدف: با توجه به نبود اطلاعات کافی از بیولوژی مولکولی پپتید‌های زهر عقرب ایرانی، هدف کلی ما در این پژوهش افزوده سازی و آنالیز توالی cDNA کد کننده یک پپتید توکسین از غده زهر عقرب Mesobuthus eupeus استان خوزستان می‌باشد. روش کار: به منظور ساخت cDNA، مجموع کل RNA از غده زهر عقرب  Mesobuthus eupeus استان خوزستان جداسازی شد و به کمک آن ساخت cDNA  صورت گرفت. در ادامه با بکارگیری تکنیک Semi-Nested RT-PCR افزوده سازی cDNA هدف انجام گرفت و قطعه نوکلئوتیدی bp 227 توالی یابی شد. نتایج: این قطعه شامل یک توالی کد‌کننده پپتید توکسین به اندازه 174 نوکلئوتید است که پروتئینی را به میزان 57 اسیدآمینه، وزن مولکولی KD 434/6 و نقطه ایزوالکتریک 12/5 را کد می‌کند. آنالیز توالی اسیدآمینه‌ای این پروتئین، پپتید راهنما، پیش پروتئین و پروتئین بالغی بطول بترتیب 19، 4 و 34 اسید آمینه را مشخص می‌کند. با همترازی این پپتید توکسین با دامین‌های مربوط به توکسین دیگر عقرب‌ها، معلوم شد که این پپتید به سوپر فامیلی توکسین- 6 تعلق دارد. نتیجه گیری نهایی: با توجه به بیشترین شباهت این پپتید توکسین با آلفا‌نوروتوکسین-1 Mesobuthus eupeus  آسیایی، می‌توان چنین نتیجه گرفت که این توکسین احیانا عضو دیگری از آلفا‌توکسین‌هاست که متعلق به عقرب  Mesobuthus eupeus  بومی استان خوزستان است.