جداسازی اسپرمهای منجمد حامل کروموزوم x و y گاومیش با روش شیب غلظت وارزیابی آن با روش هیبرید کردن در جا با ماده فلورسنت
نویسندگان
1 گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه
2 دانش آموخته دانشکده دامپزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد ارومیه
3 گروه جنین شناسی، مرکز تحقیقات پزشکی تولیدمثل ، پژوهشکده رویان
doi
10.22059/jvr.2012.24257چکیده
زمینه مطالعه: تعیین جنسیت اسپرم یکی از راههای مهم پیش انتخاب جنسی نتاج است که به همراه تلقیح مصنوعی، توانائی قابل توجهی برای بهبود رونـد اصلاح نـژاد دامهـا دارد. هدف: هدف از انجام این تحقیق ارزیابی شیب غلظت ناپیوسته Allgrad درجداسازی اسپرمهای گاومیش بر اساس کروموزومهای جنسی به روش هیبرید کردن فلورسنت درجا (FISH) بود. روش کار: جهت جداسازی اسپرمهای حاوی کروموزومهای جنسی و منی منجمد گاومیش پس از ذوب به روش شیب غلظت ستونی از غلظت نامتناوب 4 لایهای از غلظت 65 تا 95 و با اختلاف 10درصد بین لایههای متوالی با استفاده از محیط تهیه گردید. نمونه اسپرم پس از ذوب برروی اولین لایه تیوب قرار گردید تا اسپرماتوزوئیدهای با چگالی مشابه را پس از سانتریفیوژ در یک سـطـح جمـع آوری واستخـراج نمـایـد. از روش بـا پـروب رنگـی تهیـه شده گاوی برای تمایز اسپرمها در محیطهای تفکیکی استفاده گردید. شمارش اسپرماتوزوئیدها برحسب وجود سیگنالهای رنگی قرمز و سبز که به ترتیب معرف اسپرمهای حامل کروموزومهای و بود صورت گرفت. نتایج: بر اساس نتایج بدست آمده اختلاف معنیداری در تعداد اسپرمهای با کروموزومهایX درمحیط مایع جداشده از لایه تحتانی نسب به فوقانی (3/78 در مقـابـل 7/21 درصـد)گـزارش گـردیـد(05/0 p