شناسایی پروتئین آنتیژنی دیکروسلیوم دندریتیکم در گوسفندان آلوده
نویسندگان
1 دانشگاه آزاد اسلامی واحد سنندج
2 دانشگاه تهران
doi
چکیده
دیکروسلیازیس یکی از بیماری های انگلی مهم در دامهاست که توسط ترماتودی بنام دیکروسلیوم دندریتیکم ایجاد میشود. تحقیق حاضر با هدف شناسایی آنتیژن تشخیصی در آلودگی طبیعی گوسفند به دیکروسلیوم دندریتیکم انجام گرفت. برای تهیه دو نوع آنتیژن بدنی و متابولیک، از کرمهای بالغ که از مجاری صفراوی کبدهای آلوده جمعآوری شده بود استفاده شد. عصاره خام ترماتود بالغ متعاقب هموژنیزاسیون و سانتریفوژ بعنوان آنتیژن بدنی تهیه شد. آنتیژن دفعی ترشحی هم با انکوباسیون کرم بالغ در شرایط آزمایشگاهی تهیه گردید. نمونه ها ابتدا با روش سدیم دو دسیل سولفات پلی اکریلامید ژل الکتروفورزیس (SDS-PAGE) تحت الکتروفورز و شناسایی پروتئین ها قرار گرفت و سپس آنتیژن (های) اختصاصی توسط روش وسترن بلاتینگ تعیین هویت شد. بدین منظور آنتیژنهای تهیه شده به کاغذ نیتروسلولز انتقال یافت و سپس با استقرار غشا در بافر مسدود کننده، آنتیبادی اولیه و آنتیبادی کونژوگه در فواصل زمانی مشخص، پروتئین اختصاصی تحت شناسایی قرار گرفت. برای بررسی وجود واکنش متقاطع، آنتیژنهای فاسیولا از هر دو نوع بدنی و دفعی ترشحی، همچنین آنتیژن کیست هیداتیک و سیستیسرکوس تنیوکولیس هم آزمایش شد. در ایمونو بلاتینگ آنتیژن های بدنی و دفعی ترشحی کرم بالغ دیکروسلیوم دندریتیکم یک باند با وزن مولکولی 130 کیلودالتون بطور مشترک در هر دو آنتیژن و در آنتیژن دفعی ترشحی علاوه بر وجود این باند، شش باند پروتئینی با وزن مولکولی بین 25 تا 60 کیلودالتون توسط سرم مثبت کوسفندان با آلودگی طبیعی مشخص گردید. بنابر یافتههای بررسی حاضر، باند پروتئینی با وزن مولکولی 130 کیلودالتون بعنوان آنتیژن اختصاصی برای تشخیص دیکروسولیازیس در گوسفند معرفی میشود.
