استفاده از روش Nested-PCR برای تشخیص آلودگی کشتهای سلولی به ویروس pestivirus
نویسندگان
1 گروه میکروبیولوژی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
2 گروه میکروبیولوژی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
3 گروه میکروبیولوژی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
4 گروه میکروبیولوژی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
5 موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج
doi
چکیده
در این مطالعه یک روش Nested-PCR برای تشخیص دو ویروس BVDV از سویه NADL بهینه سازی گردید. در آزمایش RT-PCR، قسمتی از منطقه غیر قابل ترجمه ناحیه '5 ویروس به طول 249 جفت باز تکثیر شد. محصول PCR در وکتور R/T57pTZ کلون گردید و نتیجه تعیین ردیف اسیدهای نوکلوتیدی آن اختصاصی بودن آزمایش را تایید نمود. سپس پرایمرهای داخلی انتخاب و آزمایش Nested-PCR انجام گردید و یک قطعه DNA به طول 155 جفت باز تکثیر شد. میزان حساسیت آزمایش RT-PCR، 50TCID 104 و میزان حساسیت آزمایش Nested-PCR در تشخیص ویروس BVDV در کشت سلول، 50TCID102 تعیین گردید. تعداد 7 نمونه از کشتهای سلولی با سه روش PCR, ELISAو Nested-PCR مورد آزمایش قرار گرفتند. نتایج نشان داد که حساسیت روشهای مولکولی در تشخیص ویروس در نمونهها نسبت به روش ELISA بیشتر میباشد.
