شناسایی ژنتیکی مخمرهای مقاوم به سیکلوهگزامید جداسازی شده از محصولات لبنی سنتی فاطمه نجاتی 1، جوانا فلیس2، مهدی بابایی3، فابیو فراچتی2، مارتا تبالدی2، ساندرا توریانی2، اشکان تاجبخش4، وحید براتی4، سیروس جلیل4
نویسندگان
doi
چکیده
چکیده محصولات لبنی تولید شده به روشهای سنتی دارای فلور میکروبی بسیار پیچیدهای شامل میکروارگانیسمهای همچون باکتریهای اسید لاکتیک و مخمرها هستند. روش رایج برای برای شناسایی باکتریهای اسید لاکتیک عبارت است از کشت دادن آنها در محیط کشتهایی حاوی آنتیبیوتیک سیکلوهگزامید، که با مهار سنتز پروتئین از رشد مخمرها جلوگیری میکند. با این حال، برخی از مخمرها مقاومت طبیعی و یا اکتسابی به این آنتیبیوتیک نشان داده و و بنابراین به صورت انتخابی بر روی محیط رشد میکنند. در این تحقیق تلاش شد تا این گروه از مخمرها از محصولات لبنی جداسازی و شناسایی شوند. بدین منظور 25 نمونه محصول لبنی تولید شده به صورت سنتی در محیط کشت ام.آر.اس حاوی 01/0 درصد سیکلوهگزامید کشت داده و پس از گرمخانهگذاری 48 (ساعت در ˚C30)، 32 کلونی که از لحاظ ظاهری به مخمرها شباهت داشتند برداشته شدند. انجام تست کاتالاز و بررسیهای میکروسکوپی نشاندهندهی حضور 19 مخمر درمیان 32 جدایه بود. پس از استخراج DNA ژنومی از هر جدایه، PCR به منظور تکثیر تصادفی قطعات DNA(RAPD-PCR) با استفاده از آغازگر M13 انجام شد تا اطلاعاتی درمورد خویشاوندی ژنتیکی میان جدایهها بدست آید. مقایسه چشمی الگوهای باندی RAPD-PCR بدست آمده منجر به انتخاب 5 مخمر به عنوان نماینده برای شناسایی بیشتر شد. در ادامه، آغازگرهای IST1 و IST4 برای تکثیر اختصاصی استفاده شدند و محصولات PCR پس از خالصسازی مورد آنالیز توالییابی قرار گرفتند. نتایج توالییابی نشان داد که همگی مخمرهای جدا شده به گونه کلایورومایسس مارکسیانوس تعلق دارند که گونهای با توانایی تکنولوژیکی بالا است.
