فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

سابقه و هدف: CTLA4 گیرنده مهاری لنفوسیت های T می باشد. سازه کایمر متشکل از دمین خارج سلولی CTLA4 و بخش FC از آنتی بادی IgG1 انسانی با اتصال به لیگاندهای CD80 ( B7-1) و CD86 ( B7-2) بر روی سلول های عرضه کننده آنتی ژن APC)) مانع اتصال CD28 و در نتیجه مانع فعال شدن لنفوسیت T و مهار پاسخ ایمنی می شود. این سازه به نام داروی آباتاسپت جهت درمان بیماری آرتریت روماتوئید، در سال 2005 مجوز گرفت. مواد و روش‌ها: در این تحقیق، سازه کایمرCTLA4-FC طراحی گردید و به کمک ابزارهای بیوانفورماتیک ویژگیهای آن بررسی شد. ژن سنتز شده در پلاسمید pET-28a کلون و در باکتری E.coli BL21DE3 ترانسفورم شد. پروتئین نوترکیب بیان و تخلیص شد و بررسی تمایل اتصال با روش فلوسایتومتری انجام شد. برای بررسی فعالیت بیولوژیک پروتئین نوترکیب از روش کشت لنفوسیتی مختلط ( MLR) استفاده شد. یافته‌ها: ویژگی های بیوانفورماتیکCTLA4-FC نشان داد که ساختار طراحی شده جهت بیان در سلول پروکاریوت مناسب می باشد. پروتئین نوترکیب در باکتری با غلظتmg/L 10 بیان شد. نتایج وسترن بلاتینگ و الایزا صحت پروتئین را تایید کرد. نتایج فلوسایتومتری رابطه مستقیم بین غلظت پروتئین ها و میزان MFI را نشان داد. در تست MLR هم رابطه مستقیم بین غلظت پروتئین و مهار لنفوسیت های T تایید شد.نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب CTLA4-FC تولید شده در سلول باکتریایی به خوبی به گیرنده های CD80 وCD86 متصل شد و توانست سلول های T را مهار نماید. بنابراین می تواند کاندیدای خوبی برای تولید دارو باشد.