خالص سازی و محلولسازی همزمان جسمتودهای MO-CBP2 با استفاده از شیب اوره
نویسندگان
1 گروه علوم سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
2 گروه زیست شناسی سلولی مولکولی، دانشکدهی علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی
3 پژوهشگاه ملی مهتدسی ژنتیک
4 ایران، تهران، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، پژوهشکدهی صنعت و محیط زیست، گروه مهندسی زیست فرایند
5 گروه مهندسی زیست فرایند، پژوهشکدهی صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
doi
چکیده
امروزه بیان هترولوگ پروتئینها نقشی کلیدی در بیوتکنولوژی و صنعت دارد. تشکیل اجسام تودهای در بیان هترولوگ پروتئینها، به خصوص بیان پروتئینهای یوکاریوتی در میزبانهای پروکاریوت که معروفترین آنها E. coli است؛ یکی از پردردسرترین چالشها برای محققان می باشد. تشکیل جسم تودهای اغلب به دلیل بیان بالا، پیوندهای دیسولفیدی، بار و یا کانفورماسیون خاص پروتئین است. اجسام تودهای برخی پروتئینها دارای فعالیتاند اما بسیاری نیز باید محلول و مجددا سرشته شوند تا فعالیت خود را به دست آورند. روشهای سرشته کردن مجدد پروتئین اغلب نه تنها روشهای چند مرحلهای و زمانبرند بلکه بازدهی کمی نیز دارند. در این مطالعه، برای اولین بار پروتئین MO-CBP2 از گیاه گرمسیری مورینگا اولیفرا به صورت هترولوگ بیان شد اما در باکتری E. coli تشکیل جسم تودهای داد. روشهای مختلفی برای جلوگیری از تشکیل جسم تودهای و یا سرشته کردن این پروتئین به کار گرفته شد که یکی از کارآمد ترین آنها استفاده از کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل سفارز به همراه شیب غلظت اوره 8-0 مولار بود که با بازدهی زیاد، موجب خالص سازی و سرشته شدن مجدد همزمان این پروتئین در مراحل کمتر شد. این روش که در آن میتوان پروتئین مورد نظر را تا حدود زیادی خالص و محلول کرد میتواند به عنوان روشی مناسب و کارآمد پیشنهاد شود.
