تغییر بیان ژنهای مرتبط با اتوفاژی در پاسخ به سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب زمینی (Potato virus A) در گیاه Nicotiana benthamiana
نویسندگان
1 دانشجویان دکتری، مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز.
2 دانشیار مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز
3 دانشجویان دکتری، مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز.
4 استاد مرکز تحقیقات ویروس شناسی گیاهی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شیراز.
doi
چکیده
در سالهای اخیر نقش اتوفاژی در خاموشی آرانای القاء شده توسط ویروس از طریق فعالیت پروتئینهای سرکوبگر خاموشی آرانای به اثبات رسیده است. به منظور درک بهتر نقش احتمالی سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب زمینی در فرآیند اتوفاژی (autophagy)، اثر این سرکوبگر ویروسی روی بیان تعدادی از ژنهای مهم و دخیل در اتوفاژی مورد بررسی قرار گرفت. ژنHC-Pro ویروس ای سیب زمینی در ناقل بیان pGWB17 با برچسبmyc در انتهای کربوکسیلی و پروموتور 35S در انتهای آمینی توسط تکنولوژی gatewayهمسانهسازی شد. کشتهای اگروباکتریوم حاوی HC-Proویروس ای سیب زمینی با استفاده از سرنگ در ناحیه پشتی برگهای گیاه Nicotiana benthamianaتزریق شدند. بیان ژنهای ATG2، ATG7، ATG6و AGO1در پاسخ به سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب زمینی، در فاصله زمانی پنج روز پس از تزریق، با استفاده از تکنیک ریل تایم پیسیآر (Real-Time PCR) اندازهگیری شدند. سرکوبگر خاموشیHC-Pro ویروس ای سیب زمینی میزان بیان ژنهای ATG6، ATG2و ATG7را به میزان ۸۹/۵، ۳/۷ و ۶/۷ برابر نسبت به برگهای تزریق شده با سازه حاوی پلاسمید خالی pGWB افزایش داد. در حالیکه میزان رونوشت AGO1بهعنوان جزء کلیدی کمپلکس خاموشی القاء شده توسط آرانای، به میزان ۳۶/۱ برابر نسبت به میزان آن در برگهای فاقد HC-Proکاهش نشان داد. نتایج این تحقیق حاکی از دخالت ژنهای ATG2، ATG7، ATG6و AGO1در پاسخهای دفاعی گیاه N .benthamianaدر مقابل سرکوبگر خاموشی HC-Pro ویروس ای سیب زمینی و امکان استفاده از آن در تدوین روشهای جدید مدیریت ویروسهای گیاهی میباشد.