تهیه سازه برای ایجاد مقاومت همزمان به سه ویروس PLRV، PVX و CMV در سیب زمینی از طریق RNA Silencing
نویسندگان
1 کارشناسی ارشد، دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران
2 دانشیار، دانشکده کشاورزی دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران
3 استاد، دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران
doi
10.22059/ijhs.2021.298680.1775چکیده
سیبزمینی در جهان از نظر تولید پس از گندم، برنج و ذرت در جایگاه چهارم اهمیت قرار دارد. به دلیل تکثیر رویشی، ویروسها از عوامل بیماریزای مهم در سیبزمینی محسوب میشوند. در گیاهان، خاموشی RNA یک ساز و کار دفاعی علیه ویروسهاست. تحقیقات زیادی برای ایجاد مقاومت به ویروسها با خاموش کردن ژنهای خاص آنها صورت گرفته است، اما در نهایت به خاطر فعالیتِ پروتئینهای ویروسیِ ممانعت کننده از خاموشیِ RNA، مقاومت گیاه شکسته شده و ویروس قادر به تکثیر و ایجاد خسارت میشود. هدف از این تحقیق ایجاد مقاومت همزمان برای سه ویروس مهم PLRV، PVX و CMV در سیبزمینی است. قطعاتی از ژن های پروتئینهای سرکوبگر خاموشی RNA در ویروسهای فوق، به ترتیب P0، P25 و 2b به کمک PCR با آغازگرهای اختصاصی تکثیر و به هم متصل شدند. قطعه نوترکیب ساخته شده در داخل پلاسمید pFGC5941 در جهت سنس و آنتیسنس در دو طرف اینترون تحت پروموتر 35S بصورت تولید کننده RNA با ساختار سنجاقسری قرار گرفت. قسمت T-DNA پلاسمید حاصل به کمک آگروباکتریوم به سیبزمینی رقم آگریا انتقال یافت. لاینهای تراریخته بهدستآمده بهمنظور تأیید حضور ترانسژن، توسط PCR بررسی شدند و لاینهای تراریخته انتخاب و تکثیر یافتند. در ادامه تحقیق قرار است مقاومت لاینهای منتخبِ تراریخته به سه ویروس سنجیده شود.