تهیه سازه برای ایجاد مقاومت همزمان به سه ویروس ‏PLRV، ‏PVX‏ و ‏CMV‏ در سیب زمینی از طریق ‏RNA Silencing

نویسندگان

1 کارشناسی ارشد، دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران

2 دانشیار، دانشکده کشاورزی دانشگاه شهید مدنی آذربایجان، تبریز، ایران

3 استاد، دانشکده کشاورزی دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران

doi
10.22059/ijhs.2021.298680.1775
چکیده

سیب‌زمینی در جهان از نظر تولید پس از گندم، برنج و ذرت در جایگاه چهارم اهمیت قرار دارد. به دلیل تکثیر رویشی، ویروس‌ها از عوامل بیماریزای مهم در سیب­زمینی محسوب می­شوند. در گیاهان، خاموشی RNA یک ساز و کار دفاعی علیه ویروس‌هاست. تحقیقات زیادی برای ایجاد مقاومت به ویروس‌ها با خاموش کردن ژن­های خاص آنها صورت گرفته است، اما در نهایت به خاطر فعالیتِ پروتئین‌های ویروسیِ ممانعت کننده از خاموشیِ RNA، مقاومت گیاه شکسته شده و ویروس قادر به تکثیر و ایجاد خسارت می‌شود. هدف از این تحقیق ایجاد مقاومت هم‌زمان برای سه ویروس مهم PLRV، PVX و CMV در سیب­زمینی است. قطعاتی از ژن های پروتئین‌های سرکوبگر خاموشی RNA در ویروس‌های فوق، به ترتیب P0، P25 و 2b به کمک PCR با آغازگرهای اختصاصی تکثیر و به هم متصل شدند. قطعه نوترکیب ساخته شده در داخل پلاسمید pFGC5941 در جهت سنس و آنتی­سنس در دو طرف اینترون تحت پروموتر 35S بصورت تولید کننده RNA با ساختار سنجاق‌سری قرار گرفت. قسمت T-DNA پلاسمید حاصل به کمک آگروباکتریوم به سیب­زمینی رقم آگریا انتقال یافت. لاین­های تراریخته به‌دست‌آمده به‌منظور تأیید حضور ترانس­ژن، توسط PCR بررسی شدند و لاین‌های تراریخته انتخاب و تکثیر یافتند. در ادامه تحقیق قرار است مقاومت لاین­های منتخبِ تراریخته به سه ویروس سنجیده شود.