طراحی، ساخت و انتقال سازههای ژنی جهت خاموشسازی ژنهای F3′5′H و F3′H در انگور رقم شیراز
نویسندگان
1 دانشجوی سابق دکتری و استاد، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج
2 دانشجوی سابق دکتری و استاد، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج
3 دانشیار پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری، تهران
4 پژوهشگر و استاد مؤسسۀ CSIRO، ادلاید، استرالیا
5 پژوهشگر و استاد مؤسسۀ CSIRO، ادلاید، استرالیا
doi
10.22059/ijhs.2015.54120چکیده
بهمنظور مطالعۀ عملکرد ژنهای F3´5´H و F3´H وبرهمکنش آنها در مسیر بیوسنتز فلاونوئیدها در انگور، از طریق طراحی و ساخت سازههای مناسب ایجادکنندۀ ihpRNA، لاینهای تراریخت حاوی سازۀ خاموشکنندۀ ژن F3´H وسازۀ خاموشکنندۀ هر دو ژن F3´5´H و F3´H ایجاد شدند. به این منظور قطعاتی از دو ژن انتخاب و بهصورت تکرارهای معکوس در ناقل pHANNIBAL درج و با بهرهگیری از سیستم ناقل دوگانه، هر یک از سازههای تهیهشده وارد ناقل p27 mod GFP 4a و به اگروباکتری منتقل شد. کالوسهای جنینزای حاصل از کشت پرچم، توسط کشت توأم با اگروباکتری تراریخت شدند. بیان ژن GFP در کالوسهای جنینزا، پنج روز پس از تلقیح با میکروسکوپ مشاهده شد. درنهایت از کشت کالوسهای جنینزای دارای سازۀ خاموشی ژن F3′Hوسازۀ خاموشی همزمانF3′H و F3′5′H بهترتیب 42 و 34 لاین باززایی شدند که براساس واکنش زنجیرهای پلیمراز، 36 لاین برای سازۀ خاموشی ژن F3′H و 27 لاین برای سازۀ خاموشی همزمانF3′H و F3′5′H، مثبت ارزیابی شدند که این نتیجه نشان از کارایی بالای روش باززایی و تراریختی استفادهشده بود
