فهرست نشریات علمی دسترسی آزاد ایران

مقاله پژوهشی مقدمه: L-asparaginase آنزیم دارویی برگرفته شده از باکتری اشرشیاکلی می‌باشد و یکی از داروهایی است که در درمان سرطان خون حاد لنفوبلاستیک به کار می‌رود. کاهش آسپاراژین خون بعد از استفاده از آنزیم آسپاراژیناز می‌تواند مرگ را برای این سلول‌ها به دنبال داشته باشد. هدف از این طرح، بررسی امکان تولید و تخلیص آنزیم آسپاراژیناز می‌باشد. روش‌ها: ژن آنزیم آسپاراژیناز موجود در ژنوم باکتری اشرشیاکلی با استفاده از تکنیک PCR تکثیر شد. پس از تخلیص، ژن فوق در وکتور pET28a کلون و به میزبان باکتری انتقال داده شد. پس از ترانسفورماسیون، شرایط مختلف بیان پروتئین جهت بهینه‌سازی بررسی گردید. بیان آنزیم نوترکیب به کمک SDS-PAGE و وسترن بلات تأیید شد. سپس آنزیم آسپاراژیناز با روش کروماتوگرافی تمایلی و با کمک ستون حاوی رزین Ni-NTA و روش هیبرید خالص شد و در نهایت فعالیت آنزیمی آن بررسی گردید. یافته‌ها: بیشترین میزان تولید آنزیم آسپاراژیناز در باکتری در دمای 37 درجه‌ی سانتی‌گراد، غلظت 1 میلی‌مولار از القاگر و زمان 20 ساعت پس از القاء بود. آنزیم آسپاراژیناز نامحلول با استفاده از ستون نیکل خالص شده و روی ستون فرایند تاخوردگی مجدد (Refolding) انجام شد. با توجه به فعالیت آنزیم ریفولد شده در تست فعالیت آنزیمی می‌توان نتیجه گرفت فرایند تاخوردگی مجدد آنزیم به درستی انجام شده است. نتیجه‌گیری: به دلیل اهمیت زیاد تولید آنزیم آسپاراژیناز در ایران و نیاز گروهی از بیماران برای استفاده از این آنزیم، در این پروژه با بهینه کردن فرایند بیان و تخلیص، آنزیم L-asparaginase در مقیاس آزمایشگاهی تولید شد.