کلون، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H1N1 انسانی در ردهی یوکاریوتیک سلول حشره با استفاده از وکتور باکولوویروس
نویسندگان
1 استادیار مدعو، گروه زیستشناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران و استادیار، بخش تحقیق و توسعه، مؤسسهی تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی، سازمان تحقیقات و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
2 استادیار، گروه زیستشناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
3 دانشجوی دکتری، گروه زیستشناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران
4 استادیار مدعو، گروه زیستشناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران و استادیار، مرکز تحقیقات واکسنهای نوترکیب، دانشکدهی داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
5 استادیار مدعو، گروه زیستشناسی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران و استادیار، مجتمع تولیدی- تحقیقاتی، انستیتو پاستور ایران، کرج، ایران
doi
10.22122/jims.v38i572.12948چکیده
مقدمه: ویروس آنفلوانزا H1N1 به عنوان عامل بیماریزا و تهدید کنندهی حیات انسان مطرح میشود. واکسیناسیون، از راههای مؤثر برای پیشگیری و مهار بیماری آنفلوانزا است. تولید پروتئین نوترکیب هماگلوتینین در سیستم بیانی باکولوویروس، در بستر سلول یوکاریوت حشره (Sf9) به عنوان یک راهکار مؤثر پیشنهاد شده است.روشها: توالی ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا H1N1 از National Center for Biotechnology Information (NCBI) استنتاج و پس از طراحی پرایمر اختصاصی، توالی با استفاده از هضم آنزیمی در پلاسمید pFastBacHTA کلون گردید و برای تولید یک بکمید نوترکیب به سلول DH10Bac انتقال داده شد. پس از استخراج پلاسمید مربوط و تأیید صحت کار، به داخل سلول حشره ترانسفکت گردید و بعد از بیان پروتئین توسط سلول Sf9، با روش Sodium dodecyl sulfate-Polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و Western blot، حضور پروتئین نوترکیب تأیید شد.یافتهها: ژن هماگلوتینین با طول 654 جفتباز در پلاسمید pFastBacHTA به کمک دو آنزیم BamHI و Xhol ساب کلون گردید. سلول حشره بعد از دریافت بکمید نوترکیب، پروتئینی به وزن تقریبی 60 کیلودالتون را بیان نمود. پس از استخراج پروتئین، با روشهای SDS-PAGE و Western blot تأیید انجام گرفت و با روش Lowry، غلظت پروتئین اندازهگیری شد.نتیجهگیری: سیستم بیانی باکولوویروس برای تولید پروتئینهایی با ساختار پیچیده مفید است. به طور کلی، از این طرح میتوان به این نتیجه رسید که این پروتئین در سلول حشره به میزان بالایی بیان میشود و به دلیل تشابه سیستم آن با سیستم انسانی، میتواند در آینده به عنوان جایگزین مناسب برای تخممرغهای جنیندار در زمینهی واکسیناسیون مورد استفاده قرار گیرد.
