کلونینگ و بیان پروتئین کوتاه شدهی گیرندهی عامل رشد اپیدرمی- 1 در میزبان مخمر Pichia pastoris
نویسندگان
1 دانشیار، مرکز تحقیقات زیستفنآوری، پردیس بینالملل یزد، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
2 دانشجوی دکتری، گروه ژنتیک، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد مرودشت، مرودشت، ایران
3 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
4 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران
5 استادیار، گروه ایمنیشناسی پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
6 استاد، مرکز تحقیقات زیستفنآوری، پردیس بینالملل یزد، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، ایران
7 استادیار، گروه ژنتیک پزشکی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی مشهد، مشهد، ایران
doi
چکیده
مقدمه: گیرندهی عامل رشد اپیدرمی (EGFR یا Epidermal growth factor receptor) در پاتوفیزیولوژی طیف وسیعی از تومورهای جامد نظیر گلیوبلاستوما و سرطان پستان نقش اساسی بازی میکند. بنا بر این، مسدود کردن آبشار پیام رسانی این گیرنده توسط آنتیبادی، هدف مناسبی برای درمان این سرطانها میباشد. اولین قدم در مسیر ساخت آنتیبادیهای منوکلونال تولید پروتئین نوترکیب با خلوص بالا و الگوی گلیکوزیلاسیون مشابه پروتئین انسانی است. مخمر Pichia pastoris، یکی از بهترین میزبانهای در دسترس برای این منظور میباشد.روشها: توالی کد کنندهی دومین خارج سلولی و بین غشایی پروتئین EGFR از ردهی گلیومای انسانی (A172) با استفاده از تکنیک RT-PCR (Real-time polymerase chain reaction) جداسازی گردید. این توالی، به داخل پلاسمید pPicZ alpha A کلون و به داخل سلول مخمر Pichia pastoris منتقل شد. سپس، این پروتئین با تیمار سلول با استفاده از متانول (غلظت نهایی 5/0 درصد) و به مدتهای 24، 48، 72، 96، 120، 144، 168 و 192 ساعت القا شد. در نهایت، بیان آن به روش الکتروفورز Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) بررسی گردید.یافتهها: با هضم آنزیمی پلاسمید نوترکیب واجد توالی کد کننده، قسمتی از EGFR ساخته شد. میزان پروتئین بیان شده با افزایش طول مدت القا، افزایش یافت. با این حال، پس از گذشت 3 روز از شروع القا، پروتئینهای ترشحی میزبان نیز در محیط کشت افزایش یافتند و بر روی ژل SDS-PAGE مشاهده شدند.نتیجهگیری: در این مطالعه، پروتئین EGFR تولید گردید که میتواند فرایند تولید آنتیبادی منوکلونال مهار کنندهی EGFR را به میزان چشمگیری تسریع نماید.
