تولید لنتی ویروس اینتگراز منفی به منظور بیان گذرای پروتئین مورد نظر و کاهش اثرات جانبی ویروس در ژن درمانی
نویسندگان
1 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکدهی پزشکی و کمیتهی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
2 دانشجوی دکتری، گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
3 دانشجوی دکتری، گروه پزشکی مولکولی، دانشکدهی فناوریهای نوین پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
4 گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
5 دانشیار، گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
6 استاد، گروه ژنتیک، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران
7 استادیار، مرکز تحقیقات بیماریهای ارثی کودکان، پژوهشکدهی پیشگیری اولیه از بیماریهای غیرواگیر و گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
doi
چکیده
مقدمه: وکتورهای لنتی ویروسی ابزارهای مؤثری برای ژن درمانی میباشند؛ ولی ورود پرو-ویروس به ژنوم، استفاده از آنها را خطرناک کرده است. بنابراین، وکتورهای لنتی ویروسی ناقص از نظر اینتگراز بیخطرتر را میتوان با ایجاد موتاسیون در ژن اینتگراز تولید نمود تا به طور ویژه، از ورود پرو-ویروس به ژنوم جلوگیری نماید. در این مطالعه، یک وکتور لنتی ویروسی ناقص از نظر ژن اینتگراز نسل دوم، طراحی و ساخته شد؛ این محصول، برای هدف قرار دادن ژن به طور گذرا با وکتور ویروسی مناسب میباشد.روشها: با به کار بردن استراتژی جهش زایی هدفمند با تکنیک Overlap polymerase chain reaction، یک جهش بدمعنی (D64V) در ناحیهی کاتالیتیک ژن اینتگراز در پلاسمید بستهبندی psPAX2 ایجاد و با تکنیک توالییابی، تأیید گردید. لاین سلولی HEK293T با سه پلاسمید psPAX2 (طبیعی و ناقص از نظر اینتگراز)، pLOX (پلاسمید انتقال) و PMD2G (پلاسمید انولپ) ترانسفکت گردید. سپس، ویروس برداشت و در لاین سلولی HEK293T ترانسداکت گردید. میزان بیان ژن گزارشگر Green fluorescent protein (GFP)، به مدت ده روز، در سلولهای ترانسداکت شده با ویروس طبیعی و ناقص با میکروسکوپ فلورسنت بررسی گردید.یافتهها: ما کاهش تعداد سلولهای بیان کنندهی ژن GFP را با شیب ملایم در سلولهای ترانسداکت شده با ویروس طبیعی در طول دوره مشاهده کردیم. در مقابل، در مورد ویروسهای ناقص، کاهش شدیدی در تعداد سلولهای بیان کنندهی ژن GFP داشتیم.نتیجهگیری: در این مطالعه، psPAX2 ناقص از نظر اینتگراز ساخته و تأیید گردید. نتایج نشان داد که وکتورهای لنتی ویروسی ناقص از نظر اینتگراز میتواند ابزار مفیدی برای بیان ژن به صورت گذرا و کارامد باشد. به این ترتیب، معایب هدف قرار دادن ژن با ویروس طبیعی حذف میگردد.
