ارزیابی تکنیک مولکولی تکثیر همدما به واسطهی حلقه در تشخیص کراتیتهای آدنوویروس
نویسندگان
1 کارشناس ارشد، گروه زیستشناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران
2 دانشیار، گروه میکروبیولوژی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد شهر قدس، تهران، ایران
3 کارشناس ارشد، گروه زیستشناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران
doi
چکیده
مقدمه: آدنوویروسها از مهمترین عوامل ایجاد عفونتهای چشم میباشند. شناسایی سریع و به موقع کراتیت آدنوویروسی برای درمان مناسب و جلوگیری از گسترش بیماری از مسایل عمده در تشخیص این ویروس است. روشهای تشخیص این ویروس دارای محدودیتهایی هستند و امکان استفاده از آنها به راحتی و در همهی مراکز تشخیصی وجود ندارد. در این تحقیق با کمک تکنیک مولکولی تکثیر همدما به واسطهی حلقه (LAMP یا Loop mediated isothermal amplification)، این ویروس در بیماران با دقت، سرعت و سهولت بیشتری تشخیص داده شد.روشها: پژوهش حاضر یک مطالعهی توصیفی- مقطعی بود که در سال 1391 بر روی 86 بیمار مشکوک به کراتیت آدنوویروسی مراجعه کننده به بیمارستان فارابی و لبافینژاد تهران انجام شد. DNA نمونههای بیماران به روش Boiling و DNG-Plus استخراج شد. پرایمرهای ویژه برای تکنیک LAMP به وسیلهی نرمافزار Primer explorer نسخهی 4 طراحی گردید. آزمونهای حساسیت و ویژگی برای تست LAMP انجام شد و سپس بر روی نمونهها بهینه گردید و محصول LAMP به وسیلهی اضافه کردن سایبرگرین، بررسی شد.یافتهها: تست LAMP بر اساس پلاسمید حاوی کل ژنوم آدنوویروس اپتیمایز گردید. حساسیت تست در حد یک پارتیکل ویروس ارزیابی شد و هیچ واکنش مثبتی با سایر عوامل در تست ویژگی، ایجاد نشد. از 86 نمونهی مشکوک به کراتیت آدنوویروسی، 28 نمونه (32 درصد) در تست مثبت شدند.نتیجهگیری: استفاده از تکنیک مولکولی LAMP در این تحقیق برای تشخیص کراتیت آدنوویروسی نشان داد که این تکنیک، دارای حساسیت و دقت بالایی میباشد و روشی سریع و قابل اعتماد برای تشخیص عفونتهایی مانند کراتیت، که برای درمان رضایتبخش نیازمند تشخیص سریع است، میباشد.