تولید آنتی‌بادی پلی کلونال علیه مولکول هورمون رشد نوترکیب انسانی و تهیه‌ی کیت ELISA برای اندازه‌گیری آن و مقایسه‌ی برخی شاخص‌های ارزش تشخیصی کیت با نوع تجاری

نویسندگان

1 دانشیار، گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی و مرکز تحقیقات ایمونولوژی سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان و گروه زیست‌شناسی، دانشکده‌ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران

2 دانشجوی دکتری، گروه اپیدمیولوژی، دانشکده‌ی بهداشت و تغذیه، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران

3 استادیار، گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

4 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی و کمیته‌ی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

5 استادیار، گروه علوم تشریح و بیولوژی مولکولی، دانشکده‌ی پزشکی و مرکز تحقیقات بیماری‌های ارثی کودکان، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

doi
چکیده

مقدمه: یکی از روش‌های حساس و دقیق اندازه‌گیری هورمون رشد انسانی (Human growth hormone یا hGH) روش ELISA می‌باشد. برای انجام مطالعات مربوط به تولید این هورمون و اندازه‌گیری کلینیکی آن، نیاز به آنتی‌بادی بر علیه آن و کیت اندازه‌گیری می‌باشد. با توجه به این که کیت‌های ELISA مربوطه در ایران از کشورهای دیگر تهیه می‌شوند، این مطالعه برای تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال بر ضد هورمون رشد و یک کیت ELISA داخلی برای اندازه‌گیری هورمون رشد انجام شد.روش‌ها: آنتی‌بادی پلی‌کلونال ضد hGH با ایمونیزاسیون خرگوش به مدت 10 هفته تزریق، تولید شد. سپس ویژگی آن به وسیله‌ی ایموبلاتینگ بررسی گردید. آنتی‌بادی خالص‌شده برای طراحی کیت ELISA استفاده شد. روش ELISAی ساندویچی طراحی‌شده از لحاظ مقادیر آنتی‌بادی پوشاننده و آنتی‌بادی کونژوگه استاندارد گردید. در پایان میزان حساسیت و ویژگی کیت طراحی‌شده با نمونه‌ی خارجی مقایسه شد.یافته‌ها: آنتی‌بادی پلی‌کلونال با موفقیت بر علیه هورمون رشد در خرگوش تولید و خالص شد. این آنتی‌بادی قابلیت استفاده در تست‌های وسترن بلاتینگ و ELISA را داشت. سپس کیت طراحی‌شده با نوع خارجی از نظر ارزش‌های تشخیصی مقایسه شد و ارزش تشخیصی آن 98 درصد به دست آمد.نتیجه‌گیری: این کیت دارای ارزش تشخیصی در سنجش hGH است به صورتی که می‌تواند جایگزین مناسبی برای نمونه‌ خارجی باشد. تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال و کیت اندازه‌گیری مربوطه با هزینه‌ی بسیار کمتر مقدور است و گامی در جهت خودکفایی کشور محسوب می‌شود.