جدا سازی و خالص سازی یک باکتریوسین مقاوم به اشعهی ماورای بنفش از سویهیDSH20 انتروکوک فاسیوم دارای اثر ضد باکتری لیستریا منوسیتوژنز
نویسندگان
1 دانشجوی دکتری، مرکز تحقیقات عفونتهای بیمارستانی و کمیتهی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان و گروه زیستشناسی، دانشکدهی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
2 کارشناس ارشد، گروه زیستشناسی، دانشکدهی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران
3 دانشجوی دکتری، مرکز تحقیقات عفونتهای بیمارستانی و کمیتهی تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
4 استادیار، مرکز تحقیقات بیماریهای عفونی و گرمسیری و گروه میکروبشناسی، دانشکدهی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
5 دانشیار، مرکز تحقیقات بیماریهای گرمسیری و عفونی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران
doi
چکیده
مقدمه: علاوه بر مطرح بودن باکتریوسینها به عنوان جایگزین آنتیبیوتیکهای مرسوم، کاربرد رایج آنها به عنوان مادهی نگهدارنده و محافظ در صنایع غذایی است. هدف از این مطالعه، جدا سازی و خالص سازی باکتریوسینهای مقاوم به اشعهی ماورای بنفش (Ultraviolet یا UV) از سویههای انتروکوک بود که بر ضد باکتری لیستریا منوسیتوژنز فعال باشند.روشها: سویههای باکتری انتروکوک از نمونههای مختلف بالینی جدا سازی و شناسایی شدند و تولید باکتریوسین در آنها علیه سویههای باکتری لیستریا منوسیتوژنز مورد بررسی قرار گرفت. یک ایزولهی باکتری انتروکوک، که دارای تولید قابل ملاحظهی باکتریوسین بر علیه همگی سویههای لیستریا منوسیتوژنز مورد مطالعه بود، به روش فنوتیپی و بیوشیمیایی و نیز روش ملکولی 16SrRNA مورد شناسایی قرار گرفت و در سایت NCBI (National Center for Biotechnology Information) ثبت گردید. در مرحلهی بعد، این باکتریوسین خالص سازی شد و اثرات آنزیمهای مختلف پروتئولیتیک و نیز تیمارهای pH، حرارت و اشعهی ماورای بنفش بر روی آن مورد بررسی قرار گرفت؛ وزن ملکولی آن نیز به روش SDS-PAGE مشخص گردید.یافتهها: از 70 سویهی مختلف انتروکوک جدا سازی شده، 5 ایزولهی انتروکوک دارای اثر مهاری بر علیه سویههای لیستریا منوسیتوژنز بود که از این میان، یک ایزوله بر ضد هر چهار سویهی لیستریا منوسیتوژنز مورد مطالعه، دارای اثر مهاری بود. بر اساس نتایج تعیین توالی 16SrRNA این ایزوله، مشخص شد که این باکتری، یک سویه از انتروکوک فاسیوم بود که به نام DSH20 و با شمارهی دسترسی JX567733.1در سایت NCBI به ثبت رسید. آنزیمهای پروتئولیتیک استفاده شده باعث از بین رفتن فعالیت ضدمیکروبی باکتریوسین گردید که تأییدی بر پروتئینی بودن این ترکیب بود. باکتریوسین تولیدی به اثر درجهی حرارت بالا، تغییرات pH و اشعهی ماورای بنفش مقاوم بود. وزن ملکولی باکتریوسین جدا سازی شده به روش SDS-PAGE در حدود 35 کیلودالتون تخمین زده شد.نتیجهگیری: خصوصیات بیوشیمیایی باکتریوسین مورد مطالعه از قبیل پایداری حرارتی، مقاومت به اشعهی ماورای بنفش و pH بسیار قابل توجه بود. توانایی بالقوهی این باکتریوسین، آن را به عنوان ترکیب ضد میکروبی جایگزین علیه لیستریا منوسیتوژنز و نیز نگهدارندهی غذاهای تخمیری مطرح میسازد.