مقایسه‌ی روش‌های کشت میکروبی و PCR در تعیین آلودگی رده‌های سلولی به مایکوپلاسما

نویسندگان

1 دانشجوی دکتری، گروه میکروب‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

2 استاد، گروه ایمنی شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران

3 استادیار، گروه میکروب‌شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران

4 استاد، گروه ایمنی شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران

doi
چکیده

مقدمه: مایکوپلاسماها از آلوده کنندگان اصلی رده‌های سلولی هستند که به عنوان مشکل عمده‌ی اقتصادی و بیولوژیکی در زمینه‌های تحقیقات پایه تشخیص و فرآورده‌های بیوتکنولوژی در نظر گرفته می‌شود. تشخیص مایکوپلاسما در کشت‌های سلولی ابتدا به وسیله‌ی کشت میکروبی آغاز شد و سپس رنگ آمیزی DAPI و آزمایش‌های سرولوژی از قبیل آزمایش ایمونوفلورسانس غیر مستقیم، آزمایش DNAprobe، PCR-ELISA، PCR و Real-Time PCR برای شناسایی مایکوپلاسما توسعه یافت.روش‌ها: در این مطالعه، یک روش سریع حساس اختصاصی برای تشخیص گونه‌های مختلف مایکوپلاسما در کشت‌های سلولی مورد استفاده قرار گرفت. این روش بر اساس واکنش PCR و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی جنس 11 گونه‌ی مختلف مایکوپلاسما انجام گرفت.یافته‌ها: از 183 رده‌ی سلولی مختلف موجود در بانک سلولی مورد بررسی با روش PCR 6/48 درصد رده‌های سلولی آلودگی به مایکوپلاسما را نشان داد؛ در حالی که با روش کشت میکروبی 3/27 درصد از رده‌های سلولی آلودگی به مایکوپلاسما را نشان دادند. نتایج به دست آمده توسط روش PCR در مقایسه با روش کشت میکروبی حساسیت 100 درصد و ویژگی 7/70 درصد را نشان داد.نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده با استفاده از پرایمرهای اختصاصی گونه‌های مختلف مایکوپلاسما نشان داد که مهم‌ترین و عمده‌ترین گونه‌های آلوده کننده‌ی رده‌های سلولی به ترتیب اهمیت آلودگی شامل مایکوپلاسما فرمانتانس، مایکوپلاسما آرجینینی، مایکوپلاسما هیوراینیس و مایکوپلاسما اورال بودند. این مطالعه همچنین نشان داد که برخی از رده‌های سلولی با بیش از یک گونه مایکوپلاسما آلوده بودند.