کلونینگ ژن کد کننده‌ی آنزیم مانوز 1 فسفات گوانیل ترانسفراز Leishmania Major (MRHO/IR/ER/75)

نویسندگان
ضیاء, نوشا ID 1
صالحی, رسول ID 2
پریور, کاظم ID 3
اسلامی, گیلدا ID 4
بنده پور, مژگان ID 5
کاظمی, بهرام ID 6
حجازی, سید حسین ID 7

1 کارشناس ارشد گروه بیوشیمی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم تحقیقات تهران، تهران

2 دانشیار، گروه ژنتیک و بیولوژی ملکولی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان

3 استاد، گروه بیوشیمی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم تحقیقات، تهران

4 PhD انگل شناسی،گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشکده‌ی پیراپزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید صدوقی، یزد، یزد

5 دانشجوی PhD سلولی مولکولی، مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی علوم پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، تهران

6 استاد، مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی علوم پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی تهران، تهران

7 دانشیار، گروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشکده‌ی پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان

doi
چکیده

مقدمه: Leishmania تک یاخته‌ی درون سلولی اجباری است و پشه‌ی خاکی به عنوان ناقل، با نیش زدن اشکال عفونی انگل را به میزبانان خود منتقل می‌کند. شناسایی آنتی‌ژن‌های کاندیدا برای واکسن از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است. آنزیم مانوز 1 فسفات گوانیل ترانسفراز از جمله‌ی این آنتی‌ژن‌ها می‌باشد. روش ها: با استفاده از DNAاستخراج شده از Leishmania major (MRHO/IR/75/ER) توسط PCR، ژن کدکننده‌ی آنزیم مانوز 1 فسفات گوانیل ترانسفراز تکثیر و محصول PCR در پلاسمید pTZ57R کلون شد. سپس کلنی‌های به دست آمده با دو آنزیم محدود اثرBamHI وEcoRI مورد هضم قرار گرفت. قطعه‌ی خارج شده در پلاسمید pET32a به عنوان حامل بیان ژن، ساب کلون گردید. برای تأیید کلون pET32a_man از روش هضم آنزیمی استفاده و سپس قطعه‌ی مربوط تعیین توالی گردید. یافته ها: محصول PCR بر روی ژل آگاروز الکتروفورز شد. بعد از کلون کردن محصول PCR در پلاسمید pTZ57R و pET32a، هضم آنزیمی توسط آنزیم‌های محدود اثر نشان داد که ژن کدکننده‌ی این آنزیم در هر دو پلاسمید به طور صحیح کلون شده است. نتیجه گیری: توالی ژن آنزیم تکثیر شده با توالی آن در بانک ژن 92% شباهت را نشان داد که این نتایج تأییدی بر حفاظت شده بودن (Conserved) توالی ژن این آنزیم در میان ژن‌های مختلف Leishmania major (MRHO/IR/75/ER) است. واژگان کلیدی: Leishmani major، آنزیم مانوز 1- فسفات گوانیل ترانسفراز، کلونینگ

کلیدواژه‌ها