مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA کل از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی و متابولیتهای ثانویه
نویسندگان
1 نویسنده مسئول مکاتبات، استاد، گروه زراعت و اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، گیلان پستالکترونیک: rabiei@guilan.ac.ir
2 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه زراعت و اصلاح نباتات و بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، گیلان
3 استادیار، گروه بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان، گیلان
doi
10.22092/ijrfpbgr.2014.7646چکیده
گیاهان دارویی منبع غنی از مواد مؤثره برای تولید فراوردههای دارویی هستند. جنس آویشن (Thymus) متعلق به خانواده نعناعیان است که بیش از 18 گونه آن در نواحی مختلف ایران پراکنش دارند. اثرات دارویی این گیاه مربوط به ترکیبات مختلف ازجمله مونوترپنهای فنولی کارواکرول و تیمول است، اما این ترکیبات فنولی و متابولیتهای ثانویه دیگر بهعنوان مشکل اصلی استخراج RNA مناسب برای تجزیه و تحلیل بیان ژن و مهندسی ژنتیک محسوب میشوند. هدف از انجام این پژوهش، مقایسه روشهای مختلف استخراج RNA و معرفی یک روش مناسب جهت استخراج RNA از سه گونه آویشن غنی از ترکیبات فنولی بود. ازاینرو، هفت دستورالعمل استخراج RNA شامل سه روش، دو کیت و دو بافر تجاری استخراج RNAاز نظر کمیت و کیفیت RNA استخراج شده، ارزیابی و مقایسه شدند. بهمنظور ارزیابی کمیت و کیفیت RNA از خواندن جذب در طول موج 260، 280 و 230 نانومتر، محاسبه نسبت جذب 280/260 و 230/260، الکتروفورز ژل آگارز، واکنشهای RT-PCR و Real-Time PCR استفاده شد. از بین روشهای مورد مطالعه، کمیت و کیفیت RNAی استخراج شده با روش فنل/ SDSنسبت به روشهای دیگر ازجمله TRIzol® برای هر سه گونه آویشن مناسبتر بود. از محاسن این روش کوتاه بودن زمان استخراج و ساخت دستی بافر اشباع با تریس بود که در گزارشهای قبلی بهشکل آماده خریداری شده است. در نهایت، روش فنل/ SDS تغییریافته برای استخراج RNAاز برگهای غنی از ترکیبات فنولی آویشن معرفی شد.
