غربالگری بیولوژیکی و مولکولی برخی ارقام و کلونهای امیدبخش سیبزمینی برای مقاومت به ویروس X سیبزمینی
نویسندگان
1 استادیار، موسسه تحقیقات اصلاح و تهیه نهال و بذر، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
2 دانشگاه آزاد اسلامی، واحد دامغان، دامغان، ایران.
3 دانشیار، موسسه تحقیقات اصلاح و تهیه نهال و بذر، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، کرج، ایران
doi
10.22092/sppi.2021.124605چکیده
این پژوهش بهمنظور غربالگری برخی ژنوتیپهای سیبزمینی شامل 35 رقم تجاری در ایران و 24 کلون امیدبخش حاصل از برنامههای به نژادی، نسبت به ویروس X سیب زمینی (Potato virus X = PVX) با استفاده از آزمونهای بیولوژیکی و نشانگرهای مولکولی انجام شد. برای این منظور، ابتدا جدایه ویروسی روی گیاه محک گل تکمهای مایهزنی و خالصسازی بیولوژیک و سپس با مایهزنی روی گیاه توتون، تکثیر و در محیط کشت بافت نگهداری گردید. برای ارزیابی واکنش ژنوتیپها نسبت به این ویروس از روش استاندارد مرکز بینالمللی سیبزمینی(CIP) شامل مایهزنی مکانیکی و پیوند استفاده شد. ابتدا سه گیاهچه سیبزمینی از هر ژنوتیپ بهصورت مکانیکی در شرایط گلخانهای توسط عصاره آلوده به ویروس مایهزنی شد و ژنوتیپها براساس نتایج آزمون DAS-ELISA در دو گروه مقاوم و حساس قرار گرفتند. بهمنظور تعیین نوع مقاومت ژنوتیپهای مقاوم بر روی گیاهان گوجهفرنگی آلوده به PVX در سه تکرار پیوند و آلودگی آنها توسط آزمون الایزا بررسی شد. نتایج حاصل از هر دو آزمایش مایهزنی مکانیکی و پیوند نشان داد که 12 رقم تجاری و 11 کلون امیدبخش سیبزمینی دارای مقاومت از نوع بسیار بالا (Extreme Resistance, ER) و 9 رقم تجاری و یک کلون امیدبخش دارای مقاومت از نوع فوق حساسیت (Hypersensitive Reaction, HR) نسبت به PVX بودند. سایر ژنوتیپها شامل 14 رقم تجاری و 12 کلون امیدبخش در حداقل یکی از تکرارها به PVX آلوده شدند و بهعنوان حساس شناسایی گردیدند. غربالگری برای ژنهای مقاومت Rx1 و Rx2 نیز توسط واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR) بهترتیب با استفاده از نشانگرهای اختصاصی 5RX1 و106RX2 در ژنوتیپهای با مقاومت ER انجام شد. نتایج بررسیهای مولکولی نیز نشان داد که 13 ژنوتیپ سیبزمینی دارای ژن مقاومت Rx1 و هفت ژنوتیپ دارای ژن مقاومت Rx2 بودند و در ژنوتیپهای با مقاومت HR و حساس هیچیک از این ژنها ردیابی نشد و با نتایج آزمایشهای گلخانهای و سرولوژیکی مطابقت داشت. با توجه به نتایج این پژوهش از ژنوتیپهای با مقاومت ER به ویروس و دارای ژن Rx1 و یا Rx2 می توان در برنامههای به نژادی به عنوان والد مقاوم برای تولید ارقام سیب زمینی با صفات مطلوب زراعی و مقاوم نسبت به PVX استفاده کرد.