تخلیص و بررسی ویژگی های آنتی ژنیک پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار بیان شده در باکتری Escherichia coli
نویسندگان
1 دانش آموخته کارشناسی ارشد بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه تبریز .
2 استادیار بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان.
3 دانشیار گروه گیاهپزشکی دانشکده کشاورزی دانشگاه تبریز.
4 دانشجوی دکتری بیماری شناسی گیاهی، گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان.
doi
چکیده
چکیده تخلیص انواع پروتئینهای بیان شدهی ویروسی با اهداف مختلف از جمله تولید آنتیبادیهای چند همسانهای و تک همسانهای، مطالعهی ساختاری آنها، شناسایی توالی آمینو اسیدی و توالی پپتیدی با استفاده از انواع روشهای کروماتوگرافی، صورت میپذیرد که عموماً کاربرد چنین روشهایی مستلزم صرف هزینهی زیاد میباشد. در این تحقیق سعی شد پس از بیان ژن پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار، تخلیص و خالص سازی پروتئین بیان شده مورد نظر از ژل پلی آکریل آمید انجام پذیرد. در همین راستا، پس از بیان ژن پروتئین پوششی ویروس موزاییک خیار در باکتری Escherichia coli، الکترفورز پروتئینهای استخراج شده از باکتری در ژل پلی آکریل آمید صورت گرفت که نتایج بدست آمده حاکی از تولید مطلوب پروتئین برای استخراج از ژل بود. پس از بیان ژن مورد نظر در حجم زیاد، پروتئین بیان شده در باکتری روی ژل پلی آکریل آمید الکترفورز گردید. پس از الکترفورز و تعیین محل نوار پروتئین بیان شده، محل مورد نظر از ژل بریده و تخلیص گردید. سپس، پروتئین تخلیص شده از ژل به منظور ایمنی زایی به خرگوش تزریق شد و سرم ایمن شده پس از سپری شدن زمان مناسب استحصال شد و عیار آن مشخص گردید. این روش با توجه به هزینه و امکانات قابل دسترس، در مقایسه با سایر روشهای تخلیص از جمله کروماتوگرافی، کم هزینه و کارا می باشد. همچنین نتایج دیبا و وسترن بلات با استفاده از پروتئین تخلیص شده و ایمنزایی خرگوش نشان داد که از این پروتئین میتوان به منظور تولیدآنتی سرم و آنتی بادی برای ردیابی ویروس موزاییک خیار استفاده نمود.
