تاثیر فاکتور‌های القایی بر توان رشد، کلون‌زایی و الگوی ژنتیکی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی ماهی آزاد دریای خزر در شرایط آزمایشگاهی

نویسندگان

1 دانشگاه ژاپن

2 رویان

3 تربیت مدرس

4 مدیر گروه بیولوژی دریا- دانشگاه تربیت مدرس

doi
چکیده

این مطالعه با هدف بررسی اثر فاکتور‌های مختلف رشد بر میزان تکثیر، کلون‌زایی و بیان برخی از ژن‌های اختصاصی‌ سلول‌های اسپرماتوگونی ماهی آزاد دریای خزر در شرایط آزمایشگاهی طراحی شده است. سلول‌های اسپرماتوگونی از بافت بیضه بچه ماهیان آزاد دریای خزر با استفاده از روش هضم آنزیمی دو مرحله‌ای جداسازی و از طریق حذف تمایزی خالص سازی شدند. تعلیق سلولی حاوی سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی در محیط کشت حاوی ترکیبی از فاکتور‌های مختلف رشد (bFGF، GDNF، IGF-I، EGF و LIF) به مدت چهارده روز کشت داده شدند. مساحت کلونی‌ها در روز چهاردهم در هر گروه اندازه‌گیری شد، همچنین از رنگ‌آمیزی ایمنوفلورسنت برای بررسی کیفی و کمی نشانگر DDX4/VASA در بین گروه‌های مختلف استفاده شد. بیان ژن‌های Vasa و Gfrα1 به عنوان ژن‌های اختصاصی سلول‌های زایا در گروه‌های مختلف مورد بررسی قرار گرفت. اندازه کلونی‌های اسپرماتوگونی در گروهی که تحت تاثیر چهار فاکتور رشد (bFGF+GDNF+IGF-1+EGF) قرار داشتند، به طور معنی‌داری بالاتر از سایر گروه‌های آزمایشی بود (001/0>P). با این وجود، در حضور LIF، اثر معنی داری بر روی تکثیر سلول‌های اسپرماتوگونی مشاهده نشد. رنگ‌آمیزی ایمنوفلورسنت نشان داد که کلونی‌های سلولی در گروه‌های مختلف برای نشانگر DDX4/VASA مثبت بودند و به جز گروه LIF اختلاف معنی‌داری در بین سایر گروه‌ها مشاهده نشد (05/0