جداسازی فراکسیون‌ها و اندازه‌گیری فعالیت آنزیم‌های زهر عقرب Androctinus crassicoda (Scorpionida: Buthidae)

نویسندگان

1 استادیار گروه جانوران سمی و تولید آنتی‌ونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران

2 استادیار گروه جانوران سمی و تولید آنتی‌ونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران

3 کارشناس گروه جانوران سمی و تولید آنتی‌ونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران

doi
10.22055/ivj.2023.422895.2646
چکیده

    عقرب Androctinus crassicauda یکی از اعضای خانواده بوتیده است که سم عصبی آن برای انسان کشنده است.  آنزیم­ها اجزای فراوان زهر حیوانی هستند که در ایجاد علائم موضعی و سیستمیک ناشی از مسمومیت نقش دارند.  زهر این عقرب حاوی آنزیم­های پاتولوژیک مختلفی است که از بین آن­ها، مطالعات اثرات سمی آنزیم­های هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر را گزارش کرده­اند.  این مطالعه با هدف اندازه­گیری فعالیت آنزیم­های هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر عقرب A. crassicauda و فراکسیون­های آن انجام شد.  برای این منظور، سم عقرب A. crassicauda جمع­آوری و لیوفیلیز شد.  اجزای کل زهر روی یک ستون فیلتراسیون ژل (Sephadex G-50) جدا شدند.  سپس غلظت پروتئین، فعالیت هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر خام و فراکسیون آن تعیین شد.  فیلتراسیون ژل روی Sephadex G-50 و الکتروفورز SDS-PAGE سم خام A. crassicauda به ترتیب چهار فرکشن پروتئینی و 15 باند پروتئینی با اکثریت جرم‌های مولکولی بین 0/10 تا 0/15 کیلو دالتون را نشان دادند.  مایع رویی به دست آمده از شفاف‌سازی زهر خام، محتوای پروتئین 80/71 درصد، فعالیت آنزیم هیالورونیداز بالا (40/92 درصد) و فعالیت آنزیم PLA2 پایین (1/2 ± 302 میلی‌گرم در واحد) را نشان داد.  فراکسیون 1 بیشترین فعالیت هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 را نشان داد.  ما دریافتیم که pH 5، pH بهینه برای فعالیت آنزیم هیالورونیداز است و فعالیت آنزیم فسفولیپاز A2 با افزایش زمان انکوباسیون افزایش می‌یابد.  در نتیجه، فعالیت آنزیم‌های هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 در سم A. crassicauda یافت شد و کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل این آنزیم‌ها را در فرکشن 1 جدا کرد.  چنین اطلاعاتی هم برای پیش‌بینی فعالیت بیولوژیکی اجزای زهر مهم است و هم برای توسعه پادزهرهای مؤثر مفید است.