جداسازی فراکسیونها و اندازهگیری فعالیت آنزیمهای زهر عقرب Androctinus crassicoda (Scorpionida: Buthidae)
نویسندگان
1 استادیار گروه جانوران سمی و تولید آنتیونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران
2 استادیار گروه جانوران سمی و تولید آنتیونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران
3 کارشناس گروه جانوران سمی و تولید آنتیونوم، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی، سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی (AREEO)، اهواز، ایران
doi
10.22055/ivj.2023.422895.2646چکیده
عقرب Androctinus crassicauda یکی از اعضای خانواده بوتیده است که سم عصبی آن برای انسان کشنده است. آنزیمها اجزای فراوان زهر حیوانی هستند که در ایجاد علائم موضعی و سیستمیک ناشی از مسمومیت نقش دارند. زهر این عقرب حاوی آنزیمهای پاتولوژیک مختلفی است که از بین آنها، مطالعات اثرات سمی آنزیمهای هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر را گزارش کردهاند. این مطالعه با هدف اندازهگیری فعالیت آنزیمهای هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر عقرب A. crassicauda و فراکسیونهای آن انجام شد. برای این منظور، سم عقرب A. crassicauda جمعآوری و لیوفیلیز شد. اجزای کل زهر روی یک ستون فیلتراسیون ژل (Sephadex G-50) جدا شدند. سپس غلظت پروتئین، فعالیت هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر خام و فراکسیون آن تعیین شد. فیلتراسیون ژل روی Sephadex G-50 و الکتروفورز SDS-PAGE سم خام A. crassicauda به ترتیب چهار فرکشن پروتئینی و 15 باند پروتئینی با اکثریت جرمهای مولکولی بین 0/10 تا 0/15 کیلو دالتون را نشان دادند. مایع رویی به دست آمده از شفافسازی زهر خام، محتوای پروتئین 80/71 درصد، فعالیت آنزیم هیالورونیداز بالا (40/92 درصد) و فعالیت آنزیم PLA2 پایین (1/2 ± 302 میلیگرم در واحد) را نشان داد. فراکسیون 1 بیشترین فعالیت هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 را نشان داد. ما دریافتیم که pH 5، pH بهینه برای فعالیت آنزیم هیالورونیداز است و فعالیت آنزیم فسفولیپاز A2 با افزایش زمان انکوباسیون افزایش مییابد. در نتیجه، فعالیت آنزیمهای هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 در سم A. crassicauda یافت شد و کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل این آنزیمها را در فرکشن 1 جدا کرد. چنین اطلاعاتی هم برای پیشبینی فعالیت بیولوژیکی اجزای زهر مهم است و هم برای توسعه پادزهرهای مؤثر مفید است.