تشخیص و تفسیر آسان، کم هزینه و دقیق ویروس نیوکاسل و تفریق سویه حاد از غیرحاد با روش RT-ARMS PCR آشیانه ای
نویسندگان
1 دانش آموخته دکترای عمومی، دانشکدهی دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
2 استاد گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
3 استادیار گروه ژنتیک، دانشکده علوم پایه، دانشگاه شهرکرد و پژوهشکده زیست فناوری، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
doi
10.22055/ivj.2019.185474.2135چکیده
بیماری نیوکاسل، یک بیماری ویروسی ماکیان است که توسط پارامیکسوویروس تیپ 1 از جنس Avulavirus است ایجاد میشود و تشخیص سریع و دقیق آن از اهمیت بالایی برخوردار است. حدت این ویروس به پروتئین اتصالی (F)، یکی از شش پروتئین این ویروس، بستگی دارد که میتواند ابرای تشخیص حدت سویههای آن استفاده شود. بنابراین، این مطالعه بنا دارد با توجه به پیشرفتهای علم بیوانفورماتیک، روشی پیشنهاد نماید که برای شناسایی ارزان و آسان ویروس نیوکاسل و تفریق سویههای حاد و غیرحاد آن مورد استفاده قرار گیرد. ابتدا توالی کلیهی سویههای در دسترس ویروس نیوکاسل از بانک اطلاعاتی NCBI به روش همترازی (BLAST) جمعآوری و پس از همردیفسازی، پرایمرهای عمومی و اختصاصی سویهها طراحی شدند. در مرحلهی بعد تأیید ویروس نیوکاسل با روش PCR و پرایمرهای عمومی روی cDNA نمونهی کنترل مثبت بهینهسازی شد. سپس تفریق سویهی غیرحاد از حاد با روش ARMS-PCR (سیستم بازتاب تکثیری جهش) با دو پرایمر فوروارد اختصاصی بهینهسازی شد. از آن جایی که روش مورد استفاده در این مطالعه نوعی ARMS-PCR است که بر روی cDNA حاصل از واکنش RT انجام گرفته است و همچنین به علت آن که به منظور افزایش ویژگی از محصول PCR اول به عنوان الگو برای واکنش PCR آشیانهای استفاده شده است "RT-ARMS-PCR آشیانهای" نامگذاری شده است. سپس تعدادی از نمونههای جمعآوری شده از مزارع پروش مرغ گوشتی با این روش و همچنین Real-Time PCR به عنوان تست استاندارد طلایی آزمایش شدند. نتایج نشان داد که حساسیت و ویژگی تشخیص ویروس و سویهی آن در هردو روش با هم مطابقت کامل داشتند. در مجموع این روش در مقایسه با روش Real-Time PCR با صرف زمانی اندکی بیشتر ولی هزینه، تجهیزات و پیچیدگی بسیار کمتر به عنوان جایگزین مناسبی برای روش Real-Time PCR برای تشخیص ویروس نیوکاسل و تفریق سویههای حاد از غیرحاد پیشنهاد میگردد.