اثر انجماد شیشه ای تخمک های نابالغ گوسفند بر بیان ژن HSP70 در تخمک و بلاستوسیست های حاصله
نویسندگان
1 استادیار پژوهشکده فناوری جنین دام، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
2 دانش آموخته دکتری عمومی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
3 دانشیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی و پژوهشکده فناوری جنین دام، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
4 دانشیار گروه علوم درمانگاهی، دانشکده دامپزشکی و پژوهشکده فناوری جنین دام، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران
doi
10.22055/ivj.2020.63960.1819چکیده
انجماد شیشهای سبب حذف بسیاری از مشکلات مربوط به انجماد تخمک و جنین شده است. از سویی برخی مشکلات در رابطه با تولید جنین در شرایط آزمایشگاهی ممکن است هر گونه تغییر در رونویسی ژنوم جنین را نشان دهد. هدف از این مطالعه بررسی تأثیر انجماد بر بیان ژن HPS70 (از ژنهای مربوط به استرسهای محیطی) در جنین گوسفند است. تعداد 120 مجموعه تخمک کومولوس گوسفند در مرحلهی وزیکول زایا از تخمدان گوسفندان کشتارگاهی بازیابی شد. مجموعهی تخمک کومولوس به منظور انجماد وارد محلول پایهی HTCM (با 20 درصد FBS) قرار گرفته و بلافاصله روی کرایوتاپ منتقل شده و در نیتروژن مایع قرار گرفتند. بعد از 48 ساعت از آغاز انجماد، تخمکها به ترتیب در محلولهایW1 ، W2 و W3 (هر یک به مدت 5 دقیقه) گرمسازی شدند. W1 شامل محلول پایه و 1 مول سوکرز، W2: شامل محلول پایه و 5/0 مول سوکرز و W3 محلول پایه و 25/0 مول سوکرز بود. مجموعهی تخمک کومولوس شیشهای و گرم شده (60 عدد، گروه تیمار) و مجموعه تخمک کومولوس تازه (60 عدد، گروه کنترل) طبق روال عادی آزمایشگاهی با پایهی SOF وارد فرایند IVM، IVF و IVC شدند. سپس مراحل رشد تخمک و همچنین میزان بیان ژن HSP70 نسبت به ژن β اکتین (به عنوان کنترل داخلی) بین بلاستوسیت و اووسیت قبل و بعد از انجماد مقایسه شد. بر اساس نتایج حاصل از این مطالعه انجماد شیشهای بر روی جنین در مراحل مختلف تکوین تأثیر معنیدار داشت و باعث کاهش میزان تکوین شد. همچنین میزان زندهمانی در گروه منجمد شیشهای کاهش یافت و این نکته مؤید آن است که انجماد تأثیرات منفی بر زندهمانی و میزان تکوین دارد. در مطالعهی حاضر با در نظر گرفتن دو گروه تخمکهای تازه و منجمد، میزان بیان ژن HSP70 تغییر معنیدار نشان داد ولی این اختلاف ناشی از تأثیر شیشهایسازی نبود. مرحلهی تکاملی جنین اثر معنیداری بر بیان ژن HSP70 داشت ولی میزان بیان در مراحل مختلف تکامل جنینی تحت تأثیر شیشهای شدن تخمک قرار نگرفت.