انتقال ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب (Lampyris turkestanicus) به کلزا (Brassica napus L.)

نویسندگان

1 دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی و فناوری پیشرفته

2 دانشگاه آزاد اسلامی

3 دانشگاه علم و صنعت ایران

4

doi
چکیده

پیشرفت‌های اخیر در زیست شناسی مولکولی و زیست فناوری گیاهی تصور عمومی را در مورد کاشت گیاهان به­صورت سنتی و فقط به­عنوان یک منبع غذایی به سمت این­که گیاهان به­عنوان کارخانه‌های زیستی جهت تولید پروتئین‌های نوترکیب و دارویی استفاده شوند تغییر داده است. زراعت مولکولی"Molecular farming" به تولید پروتئین‌های نوترکیب (اعم از دارویی و آنزیم‌های صنعتی ارزشمند) در گیاهان از طریق مهندسی ژنتیک اطلاق می‌شود. آنزیم لوسیفراز حشره شب‌تاب یکی از مهم­ترین آنزیم‌های صنعتی است که به­طور وسیعی در زمینه‌های مختلف زیست فناوری و زیست شناسی سلولی و مولکولی به­ویژه در تشخیص میزان ATP به­منظور تشخیص آلودگی‌های میکروبی، تهیه کیت‌های تشخیص سرطان، غربال­گری داروها، زیست‌حس­گرها، سنجش‌های آنزیمی به­عنوان ژن گزارشگر و در توالی‌یابی Pyrosequencing)DNA) استفاده می‌شود. پژوهش حاضر جهت انتقال ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب جدایه ایرانی Lampyristurkestanicus به گیاه کلزا انجام گرفت. در این پژوهش ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب ( LUC ) که تحت پیش­برنده 35S ویروس موزائیک کلم ( CaMV35S ) در پلاسمید pCAMBIA1304 همسانه سازی شده بود، به اگروباکتریوم سویه LBA4404 منتقل و به­وسیله Colony PCR و با آغازگرهای اختصاصی تایید شد. سپس پلاسمید نوترکیب شامل ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب ( LUC ) به روش مبتنی بر اگروباکتریوم به گیاه کلزا منتقل گردید. برای تراریخت سازی، ریزنمونه‌های لپه‌ای گیاه کلزا رقم PF4570/91 مورد استفاده قرار گرفت. جهت تعیین آستانه تحمل گیاه کلزا به آنتی­بیوتیک هیگرومایسین، غلظت‌های مختلف این آنتی‌بیوتیک مورد بررسی قرار گرفت. گیاهان تراریخت بر روی محیط MS حاوی آنتی‌بیوتیک هیگرومایسین انتخاب شدند و سپس به محیط‌های طویل شدن شاخه و ریشه زایی انتقال یافتند. آنالیز PCR گیاهان حضور ژن لوسیفراز حشره شب‌تاب را در گیاهان کلزای تراریخت تایید نمود.